shaweinan
第21楼2007/01/18
让我们把问题先确认一下。楼主用的是岛津10Avp液相色谱,正相硅胶柱,己烷(hexane):乙醇(ethanol):二氧杂环乙烷(dioxane)=958:40:2流动相等度洗脱,流动相已脱气,流速是1或2ml/min时,(此处有问题,液相色谱流速差一倍条件是差很多的。)柱压只有1-3MPa(压力偏低),没有发现漏液情况,用异丙醇作流动相,压力可超过200kgf(kgf是什么单位,kg/cm2吗?最好单位统一,还用MPa)。是这样吗?如果是,柱压低不会是流路堵塞;也不是气泡原因,如果是气泡的话虽然压力不稳但压力也不会太低,我觉得还是从其他方面找原因吧。
你用的色谱柱的长度是多少?填料粒径是多少?
tianru的爸爸
第24楼2007/01/19
1、你的流动相大约96%的成分是己烷,而其它成分也属于非极性溶剂,并没有很大改变溶液的极性,所以流动相在脱气之前溶解的氧气和氮气是较多的。
2、你的HPLC系统是带脱气装置的,是可以在溶液进入泵头之前脱掉相当一部分的。经常用的反相流动相就可以直接用它来脱气,因为水溶液中所含的气体量相对较少多了。
因而你的压力“一直很稳定在一个固定的值上(150mp左右)。”
3、你所用的己烷的黏度比异丙醇的小好多的,所以用己烷时反压小,而异丙醇大。
正己烷在25度时黏度值为:0.31cP;
异丙醇在25度时黏度值为:2.00cP。
而根据流体的阻力是与黏度成正比,流速的平方成正比的,仪器所测定的反压就是流体的阻力。
这就好理解了吧。
所以就有“己烷流动相,流速设定为1或者2,压力只有1-3mp”
而“用2丙醇做流动相,流量在1的时候,柱压就超过200kgf了”
4、在你用96%己烷做流动相时,出现压力大幅波动,是因为:含有少量气体的流动相在泵的往复运动中产生并随即消失:
在泵吸取溶液时,泵头有一个相对负压环境,气体被释放,出现在泵头处;
在泵泵出溶液时,泵头有一个相对正压环境,气体又被溶解,所以在后面是看不到气泡的;
在这个过程中,压力变化是会很大的,特别是在高压变的很高时,更明显。
5、加热脱气可以用超声处理的同时进行:
用超声波超声脱气时,延长脱气时间,流动相的温度会升高。
注意正己烷的沸点可不高,只有69度,如果不想进行蒸馏回流脱气,就要控制一下温度。
另外要在通风橱中操作。
6、Ve的含量测定,我是没做过,药典规定是用气相色谱法做的,不知道为什么。
个人建议:如要用液相色谱分析,就用反相色谱法,正相色谱太费事了,而且有机溶剂的毒性都不小。
你现在所遇到的问题,我都遇到过,很头疼的。