第20楼2011/01/11
SEM样品制备
戊二醛固定液的配制方法
磷酸缓冲液的配制方法:
A液:磷酸二氢钾 1.816g 溶于200ml双蒸水
B液:磷酸氢二钠 5.5g 溶于200ml双蒸水
1/15M磷酸缓冲液
pH 7.2 7.4
A液 25ml 20ml
B液 75ml 80ml
2.5%戊二醛固定液配制(pH7.2~7.4):
1)A液20ml+B液80ml混合后取95ml,再与50%戊二醛(原液)5ml均匀混合。
2)根据原液浓度的不同,可直接用1/15M磷酸缓冲液配制。
注:固定液需要新鲜配制,4℃冰箱保存。出现混浊,絮状物沉淀或pH不准确时不能使用
SEM样品制备
样品制备流程(在本人完成清洗表面、固定后,由电镜实验中心技术人员负责完成)
清洁表面:清除表面的粘液、组织液、血液及细胞碎片等附着物,充分暴露样品表面
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固定:2.5%戊二醛, 1~3小时,放置4℃冰箱或送电镜实验中心
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清洗:磷酸缓冲液,10~15m分钟,各3次
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脱水:酒精梯度脱水, 50%~70%~80%~90%~100%各15~30分钟
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干燥:叔丁醇干燥法:75%,100%2次后置冰箱冷冻10分钟,真空抽气1~1.5小时
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镀膜:真空镀膜法和离子镀膜法
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观察:扫描电镜观察、照像(存图)