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  • lumanman

    第11楼2021/04/12

    0.1ml/min平衡了9个小时,第二天早上1.0mL/min又平衡了40分钟,即使purge不完全也该流的差不多了,我换流动相的时候都会purge差不多一分钟。

    歪果仁zZ(v3255306) 发表:我认为这种问题是流动相purge不完全,管路里的流动相一直在变导致的。

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  • lumanman

    第12楼2021/04/12

    流动相是混匀后过滤膜,超声10min,单泵输送

    安平(byron1111) 发表: 流动相是混匀之后,单泵送液的么?

    可以考虑是否问题来自样品,生物样品中的杂质较多,容易积存在色谱柱内,影响色谱保留。

    可以改变进样的间隔,予以验证。

    例如第一次进样和第二次进样间隔时间30min,观察保留时间的变化程度。

    第二次进样和第三次进样间隔时间60min,

    多做几次,观察保留时间的变化程度,如果与进样次数明显相关,那么问题应该来自样品。

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  • myoldid

    第13楼2021/04/12

    应助达人

    流动相配好超声后,测一下pH。跑两个小时后,再测一下pH。另外检查一下流动相溶剂过滤头,有没污染?看你的图应该是labsolution的,岛津的不锈钢过滤头,超声一下吧。

    lumanman(lumanman) 发表: pH7.0,柱子耐受pH为1.5-9.0。平衡时间应该差不多了,晚上用0.1ml/min平衡了9个小时,第二天早上再用1.0ml/min的流速平衡了40分钟。系统压力曲线也一直监控着,压力还是挺稳的。

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  • lumanman

    第14楼2021/04/12

    pH测了,没啥问题。我下次用的时候把过滤头超声一下试试

    myoldid(v2963297) 发表: 流动相配好超声后,测一下pH。跑两个小时后,再测一下pH。另外检查一下流动相溶剂过滤头,有没污染?看你的图应该是labsolution的,岛津的不锈钢过滤头,超声一下吧。

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  • xiaoheihei

    第15楼2021/04/12

    应助达人

    大致几方面原因:
    温度控制不好,最好是严格配套柱温箱保持柱温恒定。流动相组成发生变化,注意现用现配,充分混匀后超声脱气,ph值是否随着时间缓慢变化。流动相未平衡好(特别是混合盐溶液),需对柱子进行更长时间的平衡。泵或者管路中有气泡,泵密封有磨损,压力变化,过滤头有堵塞。最后可能是色谱柱自身有变化,老化堵塞。可以换一根色谱柱对比一下。

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  • Insm_644cb201

    第16楼2021/04/25

    先看压力,安捷伦压力1bar左右,如果压力在400bar波动2bar也正常,沃特世大概在十几个psi波动,如果大于这个就不正常,如果压力正常,那就不排除管路有小气泡

    lumanman(lumanman) 发表: pH7.0,柱子耐受pH为1.5-9.0。平衡时间应该差不多了,晚上用0.1ml/min平衡了9个小时,第二天早上再用1.0ml/min的流速平衡了40分钟。系统压力曲线也一直监控着,压力还是挺稳的。

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  • dadgoh

    第17楼2021/04/25

    应助达人

    溶剂瓶加搅拌试试,会不会溶剂不均匀有梯度。

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