应助达人

今天做了一组氨的标准曲线，斜率比标准要求要高出挺多的，我做的是0.0965，标准是0.081?0.003，r是0.9998，会附有图，以前1月份也是我做的标曲，斜率是0.0834，r是0.9996，在今年3月份通过了测量审核，但是今天做标曲就无了，是不是我试剂过期了啊，所配试剂均默认为1个月保质期，最早的一个是水杨酸在5月20日过期，吸收液是5月5日配的，标准溶液是取0.1ml 1000mg/L的标液稀释而来的，是在5月7日配的。其中亚硝基铁氰化钠是在塑料瓶中，并置于冰箱保存，温度为2~8℃，水杨酸溶液也是放在塑料瓶保存的，颜色与刚配置完成时，差异不大，都是稍有黄色，常温下保存，次氯酸钠是坛墨质检的，5月5日启用，5月21日过期，也放置在冰箱中保存。请问一下我这个斜率偏高的原因会是什么原因呢。

我没有了解到这是什么问题，首先我们从分光光度法的角度去看，斜率高，一般代表灵敏度高，是好现象。只要做质控样品没有问题，回测点等质控措施没有问题，我跟人认为斜率高点就高点。

第二，斜率高低，除了跟次氯酸钠的有效氯含量有关还有温度有关。如果想确认是哪个因素导致的，需要进行多组实验。例如新购试剂，空调控制温度，显色时间等进行推断。

我自己个人判断是因为标准溶液浓度太高了，是1000mg/L标液，以前是取0.1直接稀释到1微克/毫升，斜率多为0.093左右，昨天进行了取1ml分两步稀释为1微克/毫升，斜率为0.088左右，温度跟斜率无明显关系，做过3微克点的对比，一组为22度环境，另一组为27摄氏度，结果平均相差0.002吸光度。下次买瓶100mg/L的标液试试，另外水杨酸是要塑料瓶保存的哟，全部试剂均有新配制，均无明显影响。测过标样，斜率越大，测出来的值就越小。

应助达人

我自己个人判断是因为标准溶液浓度太高了，是1000mg/L标液，以前是取0.1直接稀释到1微克/毫升，斜率多为0.093左右，昨天进行了取1ml分两步稀释为1微克/毫升，斜率为0.088左右，如果是这样的话，就是稀释中出现问题了，跟标液浓度没有关系，假设同样的条件，同样浓度的标物（1微克/毫升），同样的试剂和前处理步骤，不可能会出现这种情况。

温度跟斜率无明显关系，做过3微克点的对比，一组为22度环境，另一组为27摄氏度，结果平均相差0.002吸光度。
温度对分光光度法的测量有很明显的关系，当然你如果是22跟27，那对于一些标准物质是差别很小。所以我关注点在于是否冬季，夏季。你不信的话可以冬天不保持室内温度试一试。
下次买瓶100mg/L的标液试试，另外水杨酸是要塑料瓶保存的哟，全部试剂均有新配制，均无明显影响。测过标样，斜率越大，测出来的值就越小。
试剂并非你认为的全新配制就无问题，因为相同批次的试剂，质量都不相同，更何况不同批次或者不同品牌的试剂了。

另外由于我这边没去你那边现场做实验的条件，所以只能按照排查的套路去讲。如果你认为哪个不是这个的原因，接着排查下一个就行了。

冬天做的氨靛酚蓝使用校准过的温湿度计，测得温度为21.7摄氏度，湿度为62%，最近做的对比组为22摄氏度，湿度为57%。新配试剂和旧配试剂均通过测量编号为：BY400170的标样，测得浓度均为1.60mg/L。稀释标液过程为：取1ml的1000mg/L的标样 于100ml容量瓶中，用吸收液定容至100ml，浓度为10mg/L。再取10ml 10mg/L的标准溶液于100ml容量瓶中，并用吸收液稀释至100ml，此时标准溶液浓度为1mg/L

冬天做的氨靛酚蓝使用校准过的温湿度计，测得温度为21.7摄氏度，湿度为62%，最近做的对比组为22摄氏度，湿度为57%。新配试剂和旧配试剂均通过测量编号为：BY400170的标样，测得浓度均为1.60mg/L。稀释标液过程为：取1ml的1000mg/L的标样 于100ml容量瓶中，用吸收液定容至100ml，浓度为10mg/L。再取10ml 10mg/L的标准溶液于100ml容量瓶中，并用吸收液稀释至100ml，此时标准溶液浓度为1mg/L