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  • 闲鹤野云

    第11楼2007/06/22

    厂家讲将试剂和板子回温到室温,不要超过24小时.但为何每次的吸光度差那么大.不懂.

    rlei 发表:ELISA KIT 回温时间应该没有严格要求,一般使抗体和抗原达到最佳活性为好.厂家的使用说明书会标明这些(许多是15分钟以上,但不让超过一天),没的话就询问厂家吗.假如厂家连这一点都确定不了的话,你还敢用他的产品吗?

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  • 闲鹤野云

    第12楼2007/06/22

    谢谢,我也想过,这个应该是厂家早该做的.不过这个方法是新的,有不少地方需要研究.

    lianlxh 发表:应该做回温时间和吸光度的关系考察，找到变化稳定的时间或影响最小的时间才好，否则系统的误差太大了。没有用过，个人观点，不知对否？

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  • 家有宝贝儿

    第13楼2007/06/22

    差别真够大的啊！产品是否稳定要考虑，另外酶标仪的最佳测定值一般在0.1-1.0之间，如果能将线性控制在0.2-0.8之间是最好的，否则每次的系统误差将增大。

    ruojun 发表:我们做了10次三聚氰胺的标准曲线检测,虽然是同一个批号的试剂盒,每次都不一样,OD(吸光度)相差很大,四个标准(0,20,100,500ppb)OD值从1.5-0.8;1.2-0.5; 0.9-0.3; 0.5-0.2变化.原因在哪里.是试剂盒的问题,还是什么问题.

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  • 家有宝贝儿

    第14楼2007/06/22

    不超过24小时？时间很长，不知道有没有封口，最好不要直接与空气接触。

    ruojun 发表:厂家讲将试剂和板子回温到室温,不要超过24小时.但为何每次的吸光度差那么大.不懂.

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  • 闲鹤野云

    第15楼2007/06/22

    试剂会接触空气的,但板井我都放在空气中了.时间从30分钟到3小时不等.错了,要封口呀?温度太低应该会影响抗原抗体吸附吧

    menghandna 发表:不超过24小时？时间很长，不知道有没有封口，最好不要直接与空气接触。

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  • tianru的爸爸

    第16楼2007/06/24

    1、温度低会影响抗原抗体反应的，一般是在37度反应一个固定时间，也有用室温（20度附近）反应一个固定时间（这些时间由自己掌握，固定就行）。
    2、板子在不用的情况下，要密封起来，特别是长时间保存，不能让板子完全干透了，会影响将来的抗原抗体的结合。
    3、最后酶显色也是很重要的，如果这时的条件不能一致，波动也会增加的；同样也是保持条件一定。
    4、一直没有注意到板子回到室温的时间，没注意到它的干扰，只是注意反应的温度与时间：一般是把试剂回复到室温（用手感觉一下）再加试剂，然后再加样/试剂去反应（室温或37度保温）。

    menghandna 发表:不超过24小时？时间很长，不知道有没有封口，最好不要直接与空气接触。
    原文由 ruojun 发表:试剂会接触空气的,但板井我都放在空气中了.时间从30分钟到3小时不等.错了,要封口呀?温度太低应该会影响抗原抗体吸附吧

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  • 闲鹤野云

    第17楼2007/06/24

    1、温度低会影响抗原抗体反应的，一般是在37度反应一个固定时间，也有用室温（20度附近）反应一个固定时间（这些时间由自己掌握，固定就行）。
    2、板子在不用的情况下，要密封起来，特别是长时间保存，不能让板子完全干透了，会影响将来的抗原抗体的结合。
    3、最后酶显色也是很重要的，如果这时的条件不能一致，波动也会增加的；同样也是保持条件一定。
    4、一直没有注意到板子回到室温的时间，没注意到它的干扰，只是注意反应的温度与时间：一般是把试剂回复到室温（用手感觉一下）再加试剂，然后再加样/试剂去反应（室温或37度保温）。[/quote]
    方法是有一个固定的反应时间为30分钟,洗板后再加入成色底物反应30分钟,最后终止反应比色读数.这些过程都一样,唯一的差异是在室温的回温时间和做实验的时间:上午或下午.难道上午或下午温度不同也会导致这么大的吸光度差异?

    lxdongzi2003 发表:原文由 ruojun 发表:试剂会接触空气的,但板井我都放在空气中了.时间从30分钟到3小时不等.错了,要封口呀?温度太低应该会影响抗原抗体吸附吧

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  • 家有宝贝儿

    第18楼2007/06/26

    如果连上午和下午都差这么多，这个实验的系统适用性就有问题。
    没有其他公司的产品吗？如果有可以试试，不排除试剂盒本身的不稳定性。

    ruojun 发表:方法是有一个固定的反应时间为30分钟,洗板后再加入成色底物反应30分钟,最后终止反应比色读数.这些过程都一样,唯一的差异是在室温的回温时间和做实验的时间:上午或下午.难道上午或下午温度不同也会导致这么大的吸光度差异?

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  • 闲鹤野云

    第19楼2007/06/26

    我做个不同回温时间的实验,然后再交流.

    menghandna 发表:如果连上午和下午都差这么多，这个实验的系统适用性就有问题。
    没有其他公司的产品吗？如果有可以试试，不排除试剂盒本身的不稳定性。

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  • 一抹冰蓝

    第20楼2007/06/27

    我是外行，但有一个想法，检测环境的温湿度是否可能对检测结果造成影响，如果检测室有安装空调，并且样品的挥发性不大，挥发出的气味没有什么毒性，那么是否可以尝试先开空调在20度或25度，室内恒温半小时之后开始测试的一切工作？

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