HPTLC－生物自显影－MS联用技术对海绵中具有生物活性的天然产物的筛选

海洋无脊椎动物是一类筛选具有药用价值的活性化合物最有效的来源，每年有大约有800个新成分被发现，其中有45%来自海绵。因为无法移动的滤食动物缺乏形体上的自我保护机制，所以海绵用这些化合物来对抗觅食压力、同类竞争及生物污垢，这些活性成分表现出抗菌、抗炎、细胞毒及抗病毒的特性。尽管这些次级代谢产物非常多样化，但目前只有少数进入了临床市场，如从Cruptotethya crypta中得到的ARA A®（9-β-D-arabino-furanosy¬ladenine），它对单纯疱疹病毒表现出抗病毒作用。 在这些产品进入药品市场或临床测试之前，需要经过大量的各种实验分析。首先，采用标准生物测定对粗提物进行普通生物活性检测，如以艾希氏大肠杆菌及枯草芽胞杆菌进行片琼脂扩散法检测或以费氏弧菌进行冷光细菌检测。然而，为弄清楚单一成分和生物活性之间的关系，进行生物导向的分离是必须的。而为了达到分离和纯化的目的，各种色谱分离系统（如固相萃取、凝胶渗透色谱、半制备高效液相色谱）是必不可少的。接下来需要对单一的化合物或组分作进一步的生物活性筛选，并采用HPLC-MS或NMR进行结构解析。 在大量的寻找和鉴定新的具有生物活性化合物的工作中，和HPLC相比，HPTLC提供了一种简捷、更健全（较小的基质效应）且经济的分析方法，对30份海绵提取物平行进行色谱分离是可行的。HPTLC和基于以费氏弧菌进行冷光细菌检测的生物测定方法相结合，以及采用高分辨率质谱进行结构解析，从而为海绵中代谢物及生物活性筛选的研究提供了一套非常有效的系统。对于感兴趣的成分，可以直接从薄层板上提取并转移到MS系统而无需时间及花费高昂的分离纯化过程，片刻后即可通过高分辨率MS得到各个质谱信号及分子式。由于对HPTLC薄层板上的成分条带的提取很完全，这种方法具有和HPLC-MS相当的检测灵敏度。