高效薄层色谱结合荧光、电喷雾质谱、实时直接分析质谱测定牛奶、酸奶及油脂中异丙基噻吨酮的含量

  本文开发了两种新的HPTLC方法测定牛奶、酸奶及油脂样品中的异丙基噻吨酮（以下简称ITX），方法用加速溶剂萃取仪（Accelerated solvent extraction, 简称ASE），以环已烷与乙酸乙酯的混合溶剂提取牛奶及酸奶中的ITX；以乙腈直接萃取大豆油及人造黄油中的ITX。分别以硅胶60高效薄层板为固定相，甲苯‐正已烷（4：1，v/v）为展开剂；RP18反向高效薄层层板为固定相，乙腈‐水（9：1，v/v）为展开剂，可将ITX和内标物2,4‐二乙基噻唑酮（2,4‐Diethyl‐9H‐thioxanthen‐9‐one，以下简称DTX）分离。采用对应‐平行的点样方法，在薄层板上下点样并先后展开，可在7分钟内完成36个样品的分离。方法采用254nm（>400nm的滤光片）下荧光扫描进行定量，ITX与DTX在两种薄层板上的最低检测限（信躁比为3）均为64 pg，在含有油脂性基质（黄油）的样品中，最低检出限为1 μg/kg。20‐200μg/kg 之间的多项式回归相对标准偏差为±1.51%（r=0.99981）,自最低定量限始，样品量与信号间呈良好的线性关系（sdv=±2.18%,r=0.99893）。重复性：32ng ITX对照品在硅胶板上9次试验的变异系数（CV）为1.1%，在反相板为2.9%。含ITX分别为20、50、100μg/kg的牛奶、酸奶、豆油和人造黄油样品的变异系数（n=4）在±1.0‐6.4%之间。研究结果证明现代薄层色谱是一种测定奶质样品或油脂基质样品中ITX的快速、经济的可选方法。上述成功试验的结果可以同时采用在线电喷雾质谱（ESI/MS）（最低检测限 128 pg）与实时直接分析质谱系统（DRAT/MS）进行验证，这是高效薄层色谱的又一优势。 本法ITX 含量在20、50、400μg/kg样品的全部平均回收率，牛奶为41%、酸奶为70%、人造黄油为6%、大豆油为12%，加入内标物校正后的回收率分约为牛奶130%、酸奶70%、人造黄油和大豆油97% 常规薄层色谱技术的扫描定量曾被广泛应用，然而验证结果显示现代薄层色谱更适应于定量测定，可推荐为不同基质样品中ITX含量测定的备选方法。此外，得益于其大量的样品处理能力，本法具有快速、经济等众所周的特点，如本实验中，仅7 min共10ml溶剂即可完成36个样品的分离，意味着每个样品仅需0.2min、0.3ml溶剂。由于成功应用了加速溶剂萃取仪，使得样品处理这个最费时的操作变得流畅。本文两种高效薄层色谱方法均得到了较好的实验结果，但相比之下，正向分离方式的重现性稍好、基质干扰少（带荧光的基质集中在原点）、易于与质谱联用、花费更少。本分析程序可应于快速测定其它食品中的外源性成分等类似问题。