HPTLC免疫测定法结合特异性抗体测定神经节苷脂

简介 　　神经节苷脂是一类糖鞘脂，它在细胞识别、细胞粘附、调节细胞增殖和分化过程中扮演着重要的角色，其在人类细胞膜表面有着较高的表达，特别是神经组织中。法国Edouard Herriot医院化验室利用来自从人体黑色素瘤及其他癌细胞分离纯化的神经节苷脂给小鼠免疫接种后产生的单克隆抗体（Mab），采用HPTLC薄层板以免疫分析法检测神经节苷脂。在本项研究中， 3D2, 2C6和4F6被作为特异性抗体来识别神经节苷脂GD3 。 　　位于法国里昂的Edouard Herriot医院是法国第二大拥有病床数医院，该院Dr. Iuliana Popa与Dr. Marie-Jeanne David的研究团队通过协作建立起了在罹患神经系统疾病的患者血清中检测特异性抗神经节苷脂抗体的日常临床诊断应用。该方法被主要用来检测下列神经节苷脂的特异性抗体： • Miller-Fisher综合症患者血清中的GM1, GT1b和GQ1b • 外周神经疾病患者血清中的GM1, GD1a, GD1b, GT1b, GD3, GD2, SPG和SGPG • 黑色素瘤和视网膜母细胞瘤[1]患者血清中的GD3 　　这些抗原存在于人的坐骨神经和脊髓的总神经节苷脂提取物部位，将其进行HPTLC色谱展开后再进行免疫染色测定。 　　虽然大多数医院化验室都使用ELISA检测试剂盒和微量滴定板进行酶联免疫吸附试验，但Dr. Popa和她的团队选择使用HPTLC技术。该技术优于ELISA的最大特点在于可肉眼观察每一个免疫染色成分的斑点，这使得可同时测定外周神经疾病患者血清中的多种抗原。另一个优点在于 　　HPTLC免疫检测方法相比传统化学方法减少了样品制备的工作量。并且即便在没有特异性抗体的情况下，痕量的抗原物质也同样能够得到检测。在拥有高度亲和的抗体时，更可获得ng级检测限。类似地，与类脂体有着高度亲和能力的蛋白质－如霍乱毒素－可与低至0.1 ng级的神经节苷脂GM1发生反应。