HPLC的主要分离方法-6.离子色谱

离子色谱

1 离子交换色谱(Ion Exchange Chromatography，IEC)

离子交换色谱是一种以离子交换剂为固定相，用来分离分析阳离子和阴离子的液相色谱法，其分离原理是溶质离子和流动相中的抗衡离子间与离子交换剂上的固定离子点位的亲合竞争。
凡是在溶液中能够电离的物质，通常都能用离子交换色谱进行分离，它不仅适用于无机离子混合物的分离，也可用于有机物的分离，特别是氨基酸、核酸、蛋白质等生物物质的分析。

一、离子交换色谱固定相
高效离子交换色谱固定相通常是具有高机械强度和传质快的离子交换剂，一般在有机高聚物或硅胶上接枝有机季胺或磺酸基团交换基团。

• 聚合物多孔离子交换树脂
  
• 硅胶化学键合离子交换剂
• 表面薄壳型离子交换树脂

二、离子交换色谱的流动相
一般采用含盐的水溶液作为流动相，流动相选择应满足：

• 能够溶解各种盐并提供离子交换必需的缓冲液
• 具有合适的离子强度以便控制样品离子的保留值
• 对被分离的对象有选择性

三、离子交换色谱基本原理
在一定酸度下，样品离子和洗脱离子与离子交换基的相互作用决定离子交换色谱的保留值。
对于阳离子交换色谱，样品离子X⁺和流动相离子Y⁺与争夺离子交换剂上的交换中心R^-；而对于阴离子交换色谱，样品离子X^-和流动相离子Y^-与争夺离子交换剂上的交换中心R⁺。与离子交换剂上交换中心作用力强的样品离子保留时间长，反之就短。
四、 氨基酸分析仪

2 离子色谱

1975年Small发明了采用电导检测器检测离子交换色谱流出液方法。为有别于以往的离子交换色谱法，他把这一方法称为"离子色谱"。

课堂问题：为什么常规的离子交换色谱不能采用电导检测呢？

一、 抑制型离子色谱

（1）抑制原理

阴离子分析采用低容量的强酸型阴离子交换柱分离柱, NaHCO₃和Na₂CO₃混合液作流动相。采用高容量的强酸型阳离子交换柱作抑制柱, 串联在分析柱后面, 从分析柱的流出液经过抑制柱时发生抑制反应。

 
（2）抑制柱的类型

• 树脂填充柱
• 电化学抑制柱

二、非抑制离子色谱（单柱离子色谱法）
采用低容量的离子交换色谱柱分离，低电导低浓度的洗脱液，由于降低了洗出液本底电导水平，这样可采用电导检测器检测样品离子的电导。单柱法通常可在普通色谱仪上进行。
三、间接光度色谱法
间接光度法是一种离子对探针检测无紫外响应物质的技术。在离子色谱中，如果流动相含有吸收紫外光性能的洗脱离子，那么可以采用紫外检测器间接检测无紫外吸收的样品离子。