平板计数琼脂（PCA）使用说明书

产品名称：平板计数琼脂(PCA) 英文名称：Plate Count Agar 产品规格:250g 供应商：上海远慕 产品用途：PCA培养基用于检测食品、奶制品、饮用水、化妆品中微生物含量。既用于标准方法，也用于自动化螺旋板计数法。 储存条件：4 ℃保存，3 年有效。 产品描述： 平板计数琼脂（Plate Count Agar）简称PCA，是非选择性固体培养基，用于食品、化妆品和饮 用水中微生物计数。 本培养基配方采用标准法配方。 平板计数琼脂(PCA)原理： 胰蛋白胨提供有机氮源和游离氨基酸，酵母提取物提供生长因子，葡萄糖作为能量物质。平板计数琼脂培 养基中的营养成分能够支持牛奶及饮用水中绝大多数微生物的生长。 组成成分(g/L)： 胰蛋白胨 5.0 酵母提取物 2.5 葡萄糖 1.0 琼脂 15.0 pH 7.0± 0.2 配制方法： 1. 称取以上组分，或者直接称取本公司的平板计数琼脂培养基23.5g 本品，用1000ml去离子水重悬，加热搅拌使其全部溶解。 2. 平板计数琼脂培养基的灭菌温度是：121°C高温灭菌15min。 3. 待冷却至55°C时倒20ml培养基到90mm无菌培养皿中。 4. 对于酵母和霉菌含量高的样品，则用100mm培养皿，每个培养皿倒入20-25ml培养基。 待琼脂表面干燥后使用。 本产品仅供科研使用，请勿用于医药，不能用于临床治疗诊断使用！ 平板计数琼脂使用方法（平板计数法、大肠菌群平板计数法、菌落总数平板计数法） 方法一 菌落计数总数之稀释倒平板法 此方法是2010年版国家标准 GB 4789.2-2010中的菌落总数计数方法。 1、称取平板计数琼脂23.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，灭菌完成后，将获得的平板计数琼脂培养基置于45度水浴中备用。 2、样品的稀释及处理。取样品25g或者25ml，溶解于225ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，然后使得样品充分溶解和混匀。此时的样品浓度是稀释了原样品10倍。 3、10倍梯度稀释样品液。取样品溶解液1 ml，加入9ml 无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，吹打均匀，此时的溶液样品浓度是原始样品的0.01倍。每次吸取上一个样品1 ml，加入到9ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，根据这个方法继续进行样品的连续梯度稀释。 4、 选择2-3个合适的稀释度，吸取该稀释度的1 ml稀释液于无菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。 5、稀释液移入平皿后，及时将凉至45-50 ℃的琼脂培养基(可放置于45℃水浴箱保温) 注入平皿约15-25 mL，并转动平皿使菌液稀释液和琼脂培养基混合均匀。同时将琼脂 培养基倾入加有1 mL无菌生理盐水或者磷酸盐缓冲液的灭菌平皿内作空白对照。 6、待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。 7、观察结果并进行计数。30-300个菌落为合适范围，出具菌落总数计数报告。 方法二：菌落总数计数平板涂布法 1、称取平板计数琼脂23.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。 2、待冷却至55°C时倒20ml培养基到90mm无菌培养皿中，冷却后成为可以使用的平板计数平板，待表面干燥后使用。对于酵母和霉菌含量高的样品，则用100mm培养皿，每个培养皿倒入20-25ml培养基。 待琼脂表面干燥后使用。 3、样品的稀释及处理。取样品25g或者25ml，溶解于225ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，然后使得样品充分溶解和混匀。此时的样品浓度是稀释了原样品10倍。 4、10倍梯度稀释样品液。取样品溶解液1 ml，加入9ml 无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，吹打均匀，此时的溶液样品浓度是原始样品的0.01倍。每次吸取上一个样品1 ml，加入到9ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，根据这个方法继续进行样品的连续梯度稀释。 5、 选择2-3个合适的稀释度，吸取该稀释度的0. 1 ml或者0.2 ml稀释液于倒好的计数平板中，每个稀释度做两个琼脂平板。 6、使用无菌的玻棒或者其他无菌涂布物品，将稀释液在平板上涂布均匀。 7、将平板置于36±1℃温箱内培养48±2h。 8、观察结果并进行计数。30-300个菌落为合适范围。出具菌落总数计数报告。