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锤子
一、扩增流程 收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。 (一)干粉质粒 产品规格:0.5~2μg质粒干粉,保证能转化出来,不保证具体含量,请务必先转化进感受态,再挑单菌落提取后再使用。 保质期限:90天,请尽快转化。 保存温度:一般在-20°C,置于-80°C保存时间更长。 运输方式:常温运输,1周内。 使用说明: 1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min; 2、从-80°C冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记; 3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min; 4、42°C热激90s,再冰浴2min; 5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min; 6、6000rpm离心5min,仅留100μl上清混匀菌体沉淀; 7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体; 8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h; 9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要
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