细胞计数器原理

细胞培养技术中，细胞计数是一项基本功，对于标准化培养条件以及需要定量的实验来说都关键。这里介绍使用血细胞计数器对细胞进行计数的经典方法以及中间一些需要注意的细节。 制备细胞悬液： 对于贴壁生长的细胞，我们需要使用胰酶消化的方法使细胞从培养皿表面脱落 根据需要加入合适体积的培养基，将细胞进行中和及稀释，以得到均质的细胞悬液。要求尽可能将细胞吹打散开，不要残留任何细胞团 准备血细胞计数器： 使用70%乙醇将盖玻片和血细胞计数器清洁干净 将将盖玻片润湿（使用水或呼一口气，目的是使盖玻片与血细胞计数器接触更紧密，易于粘连），并覆盖至血细胞计数器上 台盼兰染色（可选）： 如果需要计算细胞的活力，则需要将细胞悬液和0.4%台盼兰等体积混合 室温孵育3-5分钟，使台盼兰进入死细胞，使死细胞着蓝色 血细胞计数器加样： 使用吸管将细胞悬液或细胞/台盼兰混合液滴加到血细胞计数器计数池的边缘。此时液滴将在虹吸的作用下进入盖玻片下方的计数池 以同样的方式在另一侧的计数池中也加入细胞悬液 将计数板放置几分钟使细胞扩散，同时用吸水纸吸除多余的液体 细胞计数： 在100倍显微镜下，移动计数板将视野对准计数板的中央大