方法验证PPT格式

一：基本原则 二：分析方法的分类 三：验证项目和要求 四：专属性—定义和要求 四：专属性（鉴别实验) 往样品中加入一些物质，把测定结果和没加入前的结果进行比较，以证明对待测物的鉴别能力。应该在科学和客观的基础上选择加入干扰物质。 四：专属性（含量和杂质测试-1） 1. 空白干扰：测试空白（包括溶剂、制剂的空白辅料等）。如果空白有吸收信号，应确认空白的信号和待测物信号完全分离或对含量测定没有影响。 2. 杂质干扰：当杂质可得时，往纯的待测品中加入适量的杂质，应证明加入后的测试结果没有受收到影响。 四：专属性（含量和杂质测试-2） 3. 强降解试验：当杂质或降解产物不可得时，可以把待测物强力降解（酸、碱、氧化、高温、强光、高湿） ，把降解后的试验结果和正常的测试结果进行比较（如把降解后的色谱图和未降解样品的色谱图进行比较）或者和药典方法或已验证的另外的方法进行比较。如果方法还用于稳定性试验，应当进行此试验。 4. 峰纯度：对于HPLC方法，应当进行该试验。如果方法还用于稳定性试验，应当对峰纯度进行试验。可以通过以下两种方法：1）通过改变色谱柱的填料和流动相（即用不同的方法进行测试; 2) 用二极管阵列检测器在样品峰和标准品峰的不同时间进行波谱扫描，对比不同时间点光谱的一致性。 五：范围 　范围是指在特定的范围内，方法可以提供可信的准确度、线性和精密度。根据方法的不同和测试目的，范围应知道涵盖如下方面： 　　含量：80~120% 　　含量均匀度：70~130% 　　溶出度：标准规定的±20% 　　杂质：从规定的50%或定量限（两者取低者）　　 　　　　　到规定的120%。 范围是通过线形来体现的 六 线性 是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 首先观察样品浓度和检测信号的函数关系，所有的数据点应当均匀地分布在函数曲线的两侧， 如果有线性关系，则用最小二乘法对线性函数进行评估。对线性进行评估的统计参数有曲线的相关系数、Y-轴截距、斜率，残差以及100%浓度的置信区间等。 六：线性-操作1 原料药：用精确称定的纯物质配成不同的浓度溶液进行测试，也可以通过首先制备储备液，把储备液稀释成不同浓度进行测试。 制剂产品：把原料药和一定量的辅料一起混合配制成不同浓度的溶液，按照测试规程的方法进行测试。 有关物质：首先配制储备液，然后按照一定的浓度加入到待测品中（如果是制剂产品，还应当包括辅料) 六：线性-操作2 说明：可以用精确称定的方法称取5个重量配制5个浓度的样品，或用配制储备液的方法稀释5个浓度，每个浓度测定2次，100%浓度测定6次，前2次的数据用于评估线性，总共的6个数据用于系统精密度的评估，建议用后者。 六：线性-报告数据 1。线性方程 2。相关系数（不得小于0.99) 3。Y-轴截距 4。Y-轴截距的95%置信区间(应当包括“0”） 5。Y-轴截距占100%浓度的百分比(常量分析不得过2.0%，痕量分析不得过10.0%） 6。斜率，斜率的95%置信区间 7。残差平方和 七：准确度－定义　 1。准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。 2。准确度可以通过在规定的范围内测试回收率或者测定的结果与另一已验证过的方法进行对比得到。 3。需要在3个不同的浓度（通常是测定范围的上下限和方法中描述的浓度）进行至少3次测试（3×3）。 七：准确度－定义说明 说明： 1）一次测试指从称样（包括对照品和样品）到完成测定的整个过程，例如3个浓度3次测试指在3个浓度（80%，100%，120%）配制，准确称定并配制成9个样品。（有关物质可以通过储备液稀释得到3个浓度的样品，但每个浓度需要有3个样品，分别测试 2）可以在100%浓度共制备6个样，此时，该数据也可以用于方法精密度的评估。 七：准确度－操作 两种方法评估准确度 １。待验证的方法与另一验证过的标准方法进行对比（例如新方法和药典方法对比）。通常待验证的方法没有别的方法进行比较，此时用待测方法对样品进行３×３的测试，对数据进行统计。 ２。加标回收方法（杂质，制剂含量，溶剂残留） 七：准确度—操作 两个方法比较确定准确度时，需要的测定次数： 例如：一个方法的重复性测试RSD=0.5%,可接受标准（ACLrel）为1.0%，则RSD/ACLrel=0.5,在显著性水平（α=5%，即置信度为95%），Power取80%时，需要4次对比试验。 七：准确度—数据要求 原料药或制剂含量测定，准确度需要在98%~102%之间。 有关物质定量，准确度需要在90%~110% 之间。 100%浓度的数据需要在准确度95%置信度时准确度置信区间的范围内 说明：根据测试方法不同和目的不同，准确度要求可以调整。 八：精密度—定义 精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。 在相同条件下，由一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性（Repeatability），又有系统精密度和方法精密度之分；在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度，称为中间精密度（Intermediate Precision 或Ruggedness）；在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度，称为重现性。 八：精密度—操作 重复性 系统精密度：在规定范围内，用样品配制成一个100%浓度的供试液，用标准品同法配制对照液，用至少测定6次的结果进行评价（单样测定6次）。 方法精密度：在规定的范围内，用样品平行配制6个100%浓度的样品，每样测定一次，对测得的结果进行评估。 不建议用3*3的数据方式进行评估 八：精密度—操作 中间精密度：不同时间，不同人员使用不同仪器进行方法精密度测试。 重现性：当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。通常不必做。当进行重现性测试后，可以不必做中间精密度测试 八：精密度－数据要求 系统精密度： 原料药或制剂含量测定：RSD不过1.0%，根据测试方法的不同，要求不同。液相色谱遵循EP2.2.46的要求。 杂质定量测定：10%可以被接受，但实际测试时最好控制在5%以内。 方法精密度： 原料药或制剂含量测定：三倍的系统精密度或者不过2%，取较大者。 杂质定量测定：三倍的系统精密度或者不过2%，取较大者。 八：精密度－数据报告 1。各个测定数值 2。平均值 3。标准偏差（SD） 4。相对标准偏差（RSD） 5。最好能对两次测定的方法精密度进行能够综合评估，看两次测定的绝对偏差， 两次测定的结果是否有显著性差异（F检验） 九：检测限和定量限—定义 检测限：指试样中被测物能被确切地检出，但不必进行准确定量的浓度或含量。 定量限：指样品中被测物能被定量测定，且有一定的准确度和精密度的最低浓度和含量。通常情况。定量限是低浓度被测物定量检测的一项验证参数，特别是杂质和溶剂残留的测定。 九：检测限和定量限－测定方法 目视法：用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。通常用于非仪器分析方法，如滴定法和TLC法。 2) 信噪比法：用于能显示信号噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的浓度或量。一般以信噪比不小于3/1表示检测限，以信噪比不小于１０/１的浓度表示定量限 说明：算出待测杂质或溶残在溶液中检测限或定量限后还应当折算出它待测物中的含量 九：检测限和定量限-测定方法 标准偏差法和斜率法： S为线性测定时得到的校正曲线的斜率； 　　　为标准差，可以通过如下方法计算得到：⑴平行测定空白样若干次，把信号放大后求空白信号偏差；⑵在检测限的左右配制不同浓度的样品，得到的信号进行线性回归后，计算回归曲线的标准残差 十：耐用性 耐用性指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。 典型的变动因素有：被测溶液的稳定性，样品提取次数、时间，滤膜的影响等。 液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成和pH值，不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱，柱温，流速等。 气相色谱法变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、柱温，流速等。 十一：系统适应性 系统适应性：每次实验均应由系统适应性测试 对于药典中没有描述的色谱法，系统适应性条件满足如下内容：1）色谱峰对称性因子应在0.8~1.5之间，（适用于含量和有关物质检测）；2）六针连续进样的RSD不大于0.85%（只适用于含量检测）；3）定量限和检测限低于可被忽略的浓度（适用于有关物质检测）。另外，还应该规定两个色谱峰之间的分离度应不小于1.5（特殊条件下说明理由后可以小于1.5），及理论塔板数。 注意： 欧洲药典中系统适应性所允许的调整范围。