液相色谱柱保留时间不重现应考虑的方面

保留时间不重现可能由多种因素引起，通常还会影响到峰面积的重现性，建议检查以下几个方面： 1.确认流动相是新鲜配制的，比例没有错误。比如一些挥发性的溶液，如乙酸，最好及时更换。 2.确认色谱条件在色谱柱使用范围之内，如pH 范围、温度、压力。 3.仔细观察柱前压的变化，如果压力稳定，就可以判断泵的系统没有问题；如果是压力不稳定，一定会影响保留时间，这种状况通常是由于泵头里有气泡造成的。请将流动相仔细脱气，并排出泵内气泡。 4.观察色谱峰形、柱效变化情况，确认色谱柱是否被污染，如果确定色谱柱污染，可尝试使用适当溶剂冲洗。 5.如果使用梯度洗脱方法，请确认平衡时间足够长。流动相中使用离子对试剂（烷基磺酸钠等）或固定相为正相硅胶等，往往需要更长的平衡时间。 6.确认样品是否过载，减少进样量（进原进样量的10%确认）。 7.组分在色谱柱中保留不够。调整色谱条件，使样品在柱上适当保留。