抗克伦特罗单链抗体表达载体的构建与鉴定

为构建克伦特罗(Clenbuterol，CBL)单链抗体(scFv)表达载体，实现其在大肠杆菌中的表达。以pCANTAB5E．CBL质粒为模板，扩增CBL的scFv基因，与pPICZtxA载体重组，然后以重组质粒pPICZ~A—scFv为模板扩增scFv及其相连的6个组氨酸(6xHis))~段，再与载体pBV220连接，转化大肠杆菌DH5tx，阳性克隆质粒经酶切和PeR鉴定后进行目的片段的序列测定。重组菌经温度诱导表达重组单链抗体，并通过SDS．PAGE和Western blotting对其鉴定。采用竞争ELISA检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒pBV220一scFv含有插入片段，与原序列的同源性达99．8％ 重组蛋白的分子量接近37 kD，能够被抗His标签单克隆抗体特异性识别且可被游离的CBL竞争性抑制，IC50值为4．55 ng／mL。这说明我们成功构建了重组质粒pBV220一scFv并实现了其在大肠杆菌中的表达，为进一步进行CBL 免疫法快速检测奠定了一定的基础。