H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立

摘要:采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒(AIV)A/Goose/HLJ/p46/2003(H5N1)的NS1 基因,将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X 上,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞,经 BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析,表明筛选到了重组质粒pc2X-NS1。SDS-PAGE电泳 结果显示,重组质粒转化TB1大肠埃希氏菌后,经0.3mmol/L的IPTG诱导,融合蛋白MBP-NS1 得到大量表达,融合蛋白以可溶形式存在,分子质量约为67ku。Western-blotting检测结果表明, 融合蛋白MBP-NS1能够与H5N1亚型AIV活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应,而不能够与 H5N1亚型AIV灭活疫苗免疫鸭血清发生反应。试验初步建立了以纯化的融合蛋白MBP-NS1为 包被抗原的间接ELISA检测方法,为AIV灭活疫苗免疫家禽与AIV感染家禽的鉴别诊断奠定了 基础。