PCR技术检测测乳品中金黄色葡萄球菌研究（硕士论文）

金黄色葡萄球菌是引起细菌性食物中毒的重要病源菌之一,国内外由金黄色葡萄球菌引发的食物中毒屡屡发生。引起食物中毒的食品多为动物性食品、乳及乳制品等。目前,国内检测食品中金黄色葡萄球菌仍采用传统的方法,其操作繁琐,检测时间较长,通常需要3～5d才能完成,且灵敏度较低。本研究针对食品中金黄色葡萄球菌PCR检测的特殊性,建立了快速检测乳品中金黄色葡萄球菌的PCR方法,消除PCR反应抑制因子,缩短食品中金黄色葡萄球菌的检测时间,提高检测方法的灵敏性,为金黄色葡萄球菌引起的食源性疾病的快速诊断提供技术支持。 本研究以金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)为靶基因,选择特异性引物,进行PCR扩增,检测乳品中的金黄色匍萄球菌。对PCR反应体系中镁离子浓度、模板量及退火温度和循环数进行优化,以确定适宜PCR反应体系和PCR扩增程序,其适宜反应体系为:5μl 10XPCR buffer(200mM Tris-HCl[pH 8.3], 500mM KCl, 15mmMgCl_2, 0.1%[wt/vol] gelatin, 0.5% Tween 20), 4μl dNTPs混合物,0.5μl 40μmo...