用高速固定角转头不连续蔗糖梯度分离细胞器

1. 经过长时间离心，由于浓度扩散，初始阶梯梯度已变成了非线性分段连续梯度，已不存在蔗糖在某一点的浓度突变 2. 梯度取出：可用手工分层取出（每个离心管收集成50—100管，分别测试OD，并绘出OD（纵坐标）→管数（横坐标）曲线可以看出每种亚细胞构造的OD峰 或用日立DGF—U密度梯度自动制备和收集仪连续收集，DGF—U出液管直接连接到分光光度计流动池连续测OD后并在记录仪上绘出OD—容量曲线后用自动分部收集器收集成100管。根据OD峰位置判定各种亚细胞构造所在的收集管。 3. 收集的较纯亚细胞构造还可以进一步用线性连续蔗糖梯度分离和纯化。 4. 以上方法分离产物主要是大片（如质膜），大颗粒（如重线粒体）的亚细胞构造，如果要分离更分丰富的亚细胞构造，可将本文分离步骤改为（1）肝匀浆，1000xg×10分钟，留上清，沉淀稀释后在1000xg×10分钟，再留上清，（2）二次上清合并后，用上述转头18,000rpm×2.5小时，4℃，加速“9”，减速“9”，取沉淀继续运用上述分离步骤