超高效液相色谱_串联质谱法测定氧化损伤标志物8_羟基脱氧鸟苷

摘要:发展了一种超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测脱氧核糖核酸(DNA)分子中8-羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG)的方法。DNA分子在酶解过程中,脱氧鸟苷(dG)易被氧化形成8-OHdG,从而使得8-OHdG的检测结 果不准确。通过加入甲磺酸去铁铵作为保护剂,有效地避免了酶解过程造成的dG氧化。酶解液通过超滤膜(截留 相对分子质量为3 000的分子)处理,有效去除大量蛋白分子后,直接进行UPLC-MS/MS测定。采用外标法定量, 在17·6~1 400fmol范围内,8-OHdG的峰面积与其物质的量具有良好的线性关系,相关系数为0·999 8。利用本 方法测定了小牛胸腺DNA中8-OHdG的含量(用比值8-OHdG /106dG表示)为12·9±2·35,与前人报道的检测结 果一致。本方法也可以应用于评价各种氧化因素引起的DNA氧化损伤。