顶定气相色谱系列讲座（17）

人体血液中一氧化碳的分析——定量分析3

一、顶空气相色谱法

基于测定检材血中CO含量而获得碳氧血红蛋白饱和度，取一定量检材血置于顶空瓶中，加入释放剂碱性铁氰化钾（用碱性铁氰化钾比用酸好），待CO释放完全后抽取一定量顶空部位的气体注入色谱仪，记录色谱峰面积A₁。另取一些检材血通入CO气至饱和，随后通N₂气赶尽溶于血中的多余的CO气（即没与血红蛋白结合的剩余的CO），相同条件平行操作，记录色谱峰面积A₂。两次色谱峰面积之比（A₁/A₂）×100%即为检血测得碳氧血红蛋白饱和度。

色谱条件——HP5890Ⅱ气相色谱仪，色谱柱① Hayesep Q（2m×2mm 80/100目）；

② Porapak Q（2m×2mm  80/100目）；③ 13X或5A分子筛柱（3m×2mm  45/60目），柱温70℃恒温；检测器（TCD）120℃，载气为氩气，流速22mL/min。见永久性气体分离图。

绘制标准曲线——抽取不同体积的纯CO气体或相同体积的不同浓度的CO—N₂气体（用N₂逐级稀释CO气体浓度）注入色谱仪进行分析，获得标准曲线。

检材血的分析——准确抽取一定量的检材血放入顶空瓶中，加入释放剂释放血中CO气体，平衡后抽取血液上的一定量的顶空气体，注入色谱仪进行分析。

分析结果计算——根据检材血用量、顶空瓶内体积、注射体积，由标准曲线计算出检材血中CO结合量Q1（用每mL血中含CO标准状况下体积mL数表示）。

此方法通过配制标准曲线和血检材样品的分析，CO的最小检测浓度为0.02%，标准偏差为0.1%