人胰高血糖素样肽-1突变体基因原核表达质粒的构建

目的：对人胰高血糖素样肽-1（hGLP-1）进行基因突变，构建GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-4T/（Val8）hGLP-1，并在大肠杆菌中诱导表达。方法：选择大肠杆菌偏爱密码子，将hGLP-1（7～37）第2位的丙氨酸（Ala8）定点突变为缬氨酸（Val8），直接生物合成4个寡聚核苷酸片段并进行基因拼接，形成完整的hGLP-1突变体基因（Val8）hGLP-1，并连接到载体pGEX-4T-1，转化大肠杆菌BL21，BamH I与Xho I双酶切电泳鉴定与序列测定，然后诱导表达其融合蛋白。结果：经酶切电泳鉴定与测序分析，证实所合成的突变体基因（Val8）hGLP-1已克隆到pGEX-4T-1中，经SDS-PAGE分析可以诱导表达出融合蛋白。结论：成功地构建了GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-4T/（Val8）hGLP-1，为进一步获得重组hGLP-1蛋白奠定基础，为产业化规模制备hGLP-1突变体提供实验依据。