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锤子
获得乙脑病毒(JEV)鼠源单链抗体基因(ScFv)并使其在E.coli中表达。方法 利用噬菌体表面呈现技术,从抗乙脑病毒杂交瘤细胞2H4中构建噬菌体抗体库,采用双抗体夹心模式对抗体库进行富集及检测。并将所获得的阳性克隆基因插入GST融合表达载体中,构建融合表达克隆,使其在E.coli中获得稳定表达产物。结果 所构建的噬菌体抗体库经3轮的吸附、洗脱及再感染的富集过程后,共检测到7株稳定的具有乙脑抗原结合活性的阳性克隆,对其中的mu2H4-3和mu2H4-36进行了序列测定。经分析,2个克隆的基因序列一致,其重链及轻链分别属于Kabat鼠抗体基因家族中第Ⅰ及κ第Ⅵ亚群。构建为融合表达载体pG51-mu2H4后,此单链抗体mu2H4在E.coli BL21中获得表达,产量约为菌体蛋白的10%。结论 从抗乙脑病毒杂交瘤细胞中克隆并表达了特异单链抗体片段mu2H4,为下一步的人源化改造提供了资料。
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