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锤子
体外诊断试剂-超级ELISA优化方案 3 竞争抑制ELISA方法的建立 3.1 的酶标记及质量鉴定 本试验采用改良过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记在上[1],标记完后取上清用Sephedex G200 凝胶层析进行纯化,洗脱液为0.2mol/L pH7.4的PBS,流速为15ml/h,分步收集,每支3ml,以紫外分光光度计测A280吸光度值,以洗脱体积为横坐标,吸光值为纵坐标做图,收集第一峰即为酶标峰。 标记完后用紫外分光光度计在分别在280nm、及403nm处测定酶标记物的A值,计算免疫球蛋白量、摩尔比值、酶结合率以及标记率。 3.2 包被用缓冲液及最适包被抗原浓度的优化 3.2.1 包被缓冲液的优化 包被抗原时,为了得到最佳的包被效果,我们采用了碳酸盐缓冲液(50mM ph9.6 )、磷酸盐缓冲液(50mM ph7.6)、以及TRIS盐酸缓冲液(50 mM ph7.6)三种缓冲液作为包被液,抗原包被浓度为5ug/ml,及2.5ug/ml,酶标抗体工作浓度为1:400及1:300,用自动酶标仪分析,选择最佳的包被缓冲液系统(表5)。同时为了保证缓冲液能够长期保存,我们在包被液中添加了0.01%的硫柳汞作为防腐剂。
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