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锤子
PCR反应污染源的排查 如果PCR反应不慎发生污染,应逐一分析排查污染源。 一、设立对照组: 每次扩增均应设立PCR体系中各试剂的随机对照组,即除模板DNA外应包含PCR反应所需的全部组分。若扩增结果中对照组为阳性,则表明有一种或数种试剂被污染。 排查方法:将PCR反应所需各组分试剂分别置于不同的扩增反应管进行扩增,结果阳性的试剂即为被污染试剂。 二、排查环境污染源:若排除试剂污染或更换试剂后,仍然发现污染情况,则考虑可能为环境污染。应从以下装置仪器方面进行排查: (1)模板提取时真空抽干装置; (2)凝胶电泳加样器; (3)电泳装置; (4)紫外分析仪; (5)切胶用刀或手术刀片; (6)离心机; (7)冰箱门把手,冷冻架,门把手或实验台面等; (8)气溶胶; 排查方法: (a)用无菌水浸泡过的灭菌棉签擦拭可疑污染源。 (b)0.1ml去离子水浸泡。 (c)取5ml做PCR实验。 (d)电泳检测结果。 若经上述排查仍无法确定污染源,则怀疑污染空气PCR产物气溶胶污染造成,则应考虑重新设计新的与原引物无相关性的引物或可更换实验场所,以消除污染影响。
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