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通过体外表达rhIL-12,以供研究其在体内外的生物学效应。方法 外周血单个核细胞(PBMC)、粘附细胞和人口腔表皮样癌细胞KB分别经SAC(含A蛋白的金黄色葡萄球菌CowanⅠ菌株)、IFN-γ+LPS和PDBu(12,13-二丁酸佛波酯)刺激,以GIT(异硫氰酸胍)一步法提取细胞总RNA,经RT-PCR技术获取IL-12 P40和P35 cDNA,将两条基因分别插入双启动子杆状病毒转染载体pAcUW51的多角子启动子和P10启动子下游,构建真核表达载体pAcUW51/IL-12,与AcNPV共转染昆虫细胞Sf9,获取表达IL-12的细胞株,表达产物分别经SDS-PAGE,Western blot,ELISA和生物学活性鉴定。结果 rhIL-12产物的相对分子质量(Mr)经SDS-PAGE和Western blot鉴定为67×103,表达水平为15.4~15.7μg/106细胞。MTT法检测IL-12表达产物促进NK细胞杀伤K562细胞的能力比对照可提高60%,刺激PHA激活的PBMC增殖的能力最高可达到58%。结论 成功构建了双启动子杆状病毒表达载体pAcUW51/IL-12,获得了共表达IL-12 P40和P35亚单位的昆虫细胞株。
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