大鼠血红素氧合酶1（HO-1）ELISA试剂盒说明书

　　　大鼠血红素氧合酶1（HO-1）酶联免疫分析（ELISA） 　　　试剂盒使用说明书 　　 厦门慧嘉生物科技有限公司 　　　本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中血红素氧合酶1（HO-1）的含量。 实验原理： 　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠血红素氧合酶1（HO-1）水平。用纯化的大鼠血红素氧合酶1（HO-1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血红素氧合酶1（HO-1），再与HRP标记的血红素氧合酶1（HO-1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血红素氧合酶1（HO-1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠血红素氧合酶1（HO-1）浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 　保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：1800 ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 20倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 23ml×1瓶 2-8℃保存 操作步骤 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1200ng/L,800ng/L,400ng/L,200ng/L,100ng/L）。 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 温育：操作同3。 洗涤：操作同5。 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 试剂盒性能： 1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。 2.批内与批见应分别小于9%和11% 　　 检测范围： 62.5 pg/ml-4000 pg/ml 灵敏度： 15.6 pg/ml 　 保存条件及有效期： 1.试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6个月