实时荧光PCR和普通PCR方法检测病原微生物的灵敏度比较

目的通过比较两种PCR检测的灵敏度，选择不同条件下经济准确的方法检测病原微生物。方法制备标准样品用以两种PCR扩增条件的确定，通过目的基因片段设计引物，扩增菌体裂解液上清。PCR产物分别通过扩增曲线和琼脂糖电泳检测目的条带的存在，以最低检测的条带浓度作为两种不同PCR检测的最高灵敏度，通过比较，选择在不同的限制条件下较为方便经济的方法检测病原微生物。结果实时PCR中裂解菌液上清经过10^-8倍稀释后仍能观测到扩增曲线的存在。而普通PCR产物经过琼脂糖电泳染色后观测只能观测到10^-5浓度的条带，灵敏度远不及RT-PCR。结论荧光PCR检测灵敏度较高，普通PCR琼脂糖电泳方法只能达到RT-PCR检测灵敏度的一半但比较经济。