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锤子
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从H37Rv基因组中扩增Mr38 000 蛋白基因并高效表达和纯化。用PCR技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Mr 38 000蛋白序列,将其与pGEM-T-Easy 载体连接转化E.coli DH5α,构建重组克隆载体pGEM-T-Easy/ Mr 38 000,测序正确后将目的基因片断克隆入pQE-80L原核表达载体并转化E.coli DH5α,IPTG诱导目的蛋白表达。 经Western-blot 鉴定目的基因与(His)6融合表达,将已表达的蛋白质通过Ni-NTA亲和色谱柱进行纯化。PCR得到结核分枝杆菌Mr 38 000蛋白基因,测序结果与GeBank 中报道的完全一致。SDS-PAGE显示, 在Mr为38.5×103处有相应的蛋白质表达条带,Wesern blot鉴定为(His)6融合表达蛋白。经Ni-NTA亲和色谱柱进行纯化后可得到纯化的蛋白。成功克隆了铁调节蛋白基因Mr38 000 蛋白序列,并在E.coli DH5α高效表达,亲和层析后获得了纯化目的蛋白。
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