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3 导数吸光光度法
在普通吸光光度法中,如果吸光度很小,就不能得到精度很好的信号。如果其他组分的吸收重叠在吸收峰上,测定就会受干扰。导数吸光光度法有可能克服这些困难。
其原理是因为吸光度和摩尔吸光系数为波长的函数,所以朗伯-比尔定律可以用下式表示:
Aλ=ελcl
将上式对波长进行一次微分,得
若对波长进行n次微分,可得
由此可知,吸光度对波长进行微分的微分值与吸收物质的浓度之间符合朗伯-比尔定律,因此它可以用于吸收物质的定量分析。
获得微分光谱的方法可分为光学微分法和电学微分法两类,后者已在多种类型的微机控制分光光度计中得到了应用,它通常可以获得一、二、三、四阶导数光谱。
导数光谱的测量有多种方法:
(1)如果基线是平坦的,可以测量峰-谷之间的距离,这是最常用的方法。
(2)在基线平坦的情况下,也可以测量峰-基线之间的距离,这时灵敏度虽有些降低,但精度较高。
(3)作两峰的连接线,测量两峰连线到谷的距离。只要基线是直线,不管它是否倾斜,总能得到正确的值。
(4)作峰顶与谷顶的切线,使其平行于基线,然后测量两平行线的距离。
关于导数吸光光度法提高灵敏度的规律,有人指出n阶(n=1~4)导数吸光光度法的灵敏度是按4.5n倍增大。
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