如何使用酶标仪进行基于时间分辨荧光标记的 Western Blot蛋白检测和定量-Molecular Devices SpectraMax I3

蛋白检测在制药和临床研究领域是一项非常重要的项目，而 Western Blot(WB)检测则是众多蛋白检测方法中最常见的一种。 目前，检测转印到WB膜上蛋白的技术众多，包括荧光标记、银染 和化学发光法等。可是，每一种技术都有其局限，人们一直致力 于寻找提高WBs定量准确度和动态检测范围的技术方法。这里， 介绍一种最新的在SpectraMax i3或Paradigm多功能酶标仪上检 测WBs膜的蛋白分析方法。膜上使用铕元素-螯合物或链霉素标 记二抗特异结合被研究的蛋白。铕元素标记具有长荧光寿命周 期，可至1ms级别，所以荧光的检测采用时间分辨的模式，从而 可以减少来自于自发荧光和其他短寿命周期的杂光的背景。WBs 膜被置于酶标仪内，然后使用TRF卡盒进行WBs膜优化扫描。此 方法不涉及酶的检测，加之铕元素-螯合物标记物具有很强的光漂 白抗性，因而信号十分稳定能至几周到几个月，这就允许对膜进 行重复扫描以及可能进行不同条带的强度对比以及根据标品进行 更精确的定量。TRF检测方式采用单光子计数模式，所以理论的 动态检测范围为>105。实际应用中，动态检测范围则受限于高含 量条带的荧光饱和以及非特异性结合造成的背景因素。由于不使 用CCD不会出现高光溢出现象，而这却是化学发光和普通荧光检 测的常见问题，所以此方法能够提供非常锐利的条带和出色的图 像质量。这一新颖的多功能酶标仪检测平台上的Sc a n l a t e r Western Blot检测系统以其操作简便、检测灵敏和信号的超高稳 定性，提供了出色的WBs检测性能表现，必将给多功能酶标仪在 实验室应用方面带来又一重大突破！