锤子
人蛋白磷酸酶(PP)ELISA试剂盒 Human Protein Phosphatase,PP ELISA Kit 操作步骤 1.标准品的稀释:准备小试管6只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0号标准品。稀释后各管浓度分别是:320 pg/ml,160 pg/ml,80 pg/ml,40 pg/ml,20pg/ml,0 pg/ml。 在酶标包被板上设标准品孔,依次加入不同浓度的标准品50ul(建议每个浓度做2个平行孔)。 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品、酶标试剂及生物素标记的抗IL-6抗体,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl,然后再加生物素标记的抗IL-6抗体10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。 8.洗涤:操作同5。 9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行北京方程生物电话: 010-82833221 010-57266903 13269288551 在 线QQ:21570372 865468944
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