锤子
消耗积分 : 免积分
人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)ELISA试剂盒 Human Pulmonary surfatcant-associated protein D,SP-D ELISA Kit 组织样品前处理: ①1g组织切碎后加5倍体积的TBS,用均质器均质(10次)。 组织匀浆5000×g,4℃离心20分钟 TBS:50 mmol/L Tris-HCl , pH 7.6, 150 mmol/L NaCl , 蛋白酶抑制剂 [0.1 mmol/L 二异丙基氟磷酸盐 , 0.5 mmol/L 苯甲磺酰氟 , 1 g/mL甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基酮盐酸盐, 1 g/mL抗痛素, 0.1 g/mL亮肽素] ②沉淀物悬浮与5倍体积的TBA/蛋白酶抑制剂(含1 mol/L蔗糖),5000×g,4℃离心20分钟。 ③沉淀物中加入3倍体积的1%Triton X-100/TBS/蛋白酶抑制剂,匀质(10次)。37℃孵育15分钟后,5000×g离心20分钟。 ④沉淀物和匀质物中加入3倍体积的2%SDS/TBS/蛋白酶抑制剂到。组织匀浆37℃孵育15分钟后,500000×g 25℃离心。 ⑤沉淀物中加1mL 70%蚁酸到,超声破碎后5000×g 4℃离心 ⑥收集上清液并用离心浓缩(Speed Vac)干燥。加100μL DMSO并短时超声破碎成悬液。零下80℃储存这个DMSO-蚁酸溶解的改组织溶液直到使用。 ⑦检测时,依照说明书所写,用试剂盒中的标准稀释液溶解样本。 北京方程生物电话: 010-82833221 010-57266903 13269288551 在 线QQ:21570372 865468944
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