人25羟基维生素D（25(OH)D）ELISA试剂盒

人25羟基维生素D（25(OH)D）酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T 2nmol/L - 50nmol/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中25 羟基维生素D（25(OH)D）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人25 羟基维生素D（25(OH)D）水平。用纯化 的人25 羟基维生素D（25(OH)D）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中 依次加入25 羟基维生素D（25(OH)D），再与HRP 标记的25 羟基维生素D（25(OH)D）抗 体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的25 羟 基维生素D（25(OH)D）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过 标准曲线计算样品中人25 羟基维生素D（25(OH)D）浓度。 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl， 然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此 重复5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止 液后15 分钟以内进行。