示差折光检测器高效液相色谱仪的检定规程

1. 说明 1.1. 适用范围：适用于RID-10A型示差折光检测器液相色谱仪校正。 1.2. 参照依据：依国家技术监督局JJG705-2002“实验室液相色谱仪检定规程”及《中国药典》2005年版二部附录VH制定。 1.3. 器操作及环境：应符合本仪器操作及维护保养规程。 2. 检定项目和技术要求 2.1. 泵流量设定值误差：Ss应≤±2%；重复性误差：SR应≤±2% 2.2. 柱温箱温度设定值误差ΔTs：应不超过±2.0℃；柱温箱温度稳定性：应不超过1.0℃。 2.3. 基线漂移：应≤5×10-6RIU/h；基线噪声：应≤5×10-7 RIU。 2.4. 最小检测浓度：应不超过5×10-6g/ml丙三醇/水溶液。 2.5. 定性测量重复性误差(6次定量环进样)应RSD≤1.5%。 2.6. 定量测量重复性误差(6次定量环进样)应RSD≤1.5%。 3. 检定方法 3.1. 泵流量设定值误差Ss，流量稳定性误差SR的检定 3.1.1. 仪器与用具 分析天平 万分之一 秒表 精度1/100秒 容量瓶 50ml 3.1.2. 操作程序 3.1.2.1. 将泵、进样器、色谱柱和检测器连接好，以甲醇为流动相。 3.1.2.2. 按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先精密称定过重量的容量瓶收集流动相，同时用秒表记录，准确收集10～25分钟，再精密称定其重量。收集时间 符合表1规定，每个设定值重复测定3次。 3.1.3. 结果计算 按下列公式计算SS和SR： Fm=（W2-W1）/（P.t） SS=（Fm-FS）/FS×100% SR=(Fmax-Fmin)/F×100% W2为容量瓶+流动相的重量(g) W1为容量瓶的重量 P为实验条件下的流动相密度(g/cm3) t为收集流动相的时间(min) Fm为流量实测值(ml/min) FS为流量设定值 Fmin为同一组测量中流量最小值 Fmax为同一组测量中流量最大值 F为同一组测量中流量的算术平均值 3.1.4. 结果判断：SS和SR值应符合下表规定 3.1.5. 注意事项：收集时间应将“秒”换算为“分”代入公式计算。 3.2. 柱温箱温度设定值误差ΔTs、柱温箱温度稳定性Tc的检定 3.2.1. 操作程序：将温度设为40℃，将一经过校正的温度计放入柱温箱内，每隔10min读取温度计显示温度与柱温箱显示温度一次，共读取7次，求出平均值。 3.2.2. 结果计算： ΔTs=平均值与设定值之差 Tc=7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性。 3.2.3. 结果判断：柱温箱温度设定值误差ΔTs应不超过±2.0℃；柱温箱温度稳定性应不超过1.0℃。 3.3. 基线漂移和基线噪声的检定 3.3.1. 色谱条件 色谱柱：C18 流动相：水 流速：1ml/min 数据处理：龙智达GPC色谱工作站 3.3.2. 操作步骤 将仪器各部份联接好（检测器接10mv输出口），接通电源，以水为流动相，流速为1ml/min，量程范围选择0.01×10-6RIU，工作站放大倍数为5，启动泵，待基线稳定后记录基线30min和60min，根据检测器衰减的倍数和测得的基线峰-峰高对应的记录仪标度，按下式计算基线噪声和基线漂移，用检测器自身的物理量（RIU）表示。 3.3.3. 计算公式： A×0.01×10-6 基线噪声=----------------------- 10×5 B×0.01×10-6 基线漂移=----------------------- 10×5 式中： 10—检测器输出电压为10mv； 5—工作站放大倍数； 0.01×10-6—为设置量程，RIU； A—所记录基线30min内，基线最大峰-峰高对应的值，mv； B--所记录基线60min内，基线偏离原点的值，mv/h。 3.3.4. 结果判断： 基线漂移应≤5×10-6RIU/h； 基线噪声应≤5×10-7 RIU。 3.4. 最低检测浓度的检定 3.4.1. 对照品溶液的配制：配制含丙三醇5×10-6g/ml的水溶液。 3.4.2. 色谱条件： 色谱柱：C18 流动相：水 流速：1ml/min 进样量：20ul（定量环） 数据处理：龙智达GPC色谱工作站 3.4.3. 操作步骤：将仪器各部份联接好（检测器接10mv输出口），接通电源，以水为流动相，流速为1ml/min，量程范围选择0.01×10-6RIU，工作站放大倍数为5，启动泵，待基线稳定后，将上述配制好的对照品溶液进样，记录色谱图。 3.4.4. 按下式计算最小检测浓度： Cl=2·Nd·C/H 式中： Cl：最小检测浓度（g/ml）； Nd：基线噪声峰-峰高，mv； C：对照品溶液浓度（g/ml）； H：标准溶液的色谱峰高，mv。 3.4.5. 结果判断：最低检测浓度应不超过5×10-6g/ml（丙三醇/水溶液）。 3.5. 定性、定量重复性试验 3.5.1. 色谱条件 色谱柱：C18 流动相：水 流速：1ml/min 进样量：10ul（定量环） 数据处理：龙智达GPC色谱工作站 3.5.2. 操作程序 将仪器各部份联接好（检测器接10mv输出口），接通电源，以水为流动相，流速为1ml/min，量程范围选择1×10-6RIU，工作站放大倍数为5，启动泵，待基线稳定后，用进样阀的定量环注入10ul1×10-3g/ml的丙三醇水溶液，连续进样6次，记录丙三醇的峰保留时间和峰面积。 3.5.3. 结果计算： 式中： RSD%--定性（定量）测量重复性相对标准偏差； Xi--第i次测得的保留时间或峰面积； --6次测量结果的算术平均值； i--测量序号。 3.5.4. 结果判断 定性测量重复性误差：6次峰保留时间相对标准偏差(RSD)应≤1.5%。 定量测量重复性误差：6次峰面积相对标准偏差(RSD)应R≤1.5%。 4. 检定周期 4.1. 法定检定周期为1年。 4.2. 仪器维修或发现异常时应全面检定一次。 4.3. 正常自检按下表执行： 5. 附件： 附：B63314-1 Rev.2 文件历史记录 6. 附表： 表：B63314 Rev.1示差检测器高效液相色谱仪检定记录（执行）