普鲁士蓝染色液(伊红法)实验步骤

普鲁士蓝染色液(伊红法)实验步骤 操作步骤(仅供参考)： (一)石蜡切片染色： 1、组织固定于 10%中性福尔马林，常规脱水包埋。 2、切片厚度 4μm，常规脱蜡至水。 3、蒸馏水水洗 1min。 4、切片入 Perls stain(见注意事项4)，浸染15～30min。 5、蒸馏水充分冲洗 5～10min。 6、入伊红染色液，淡染细胞核 15～30s。 7、自来水冲洗 1～5s。 8、常规脱水透明，中性树胶封固 （二）冰冻切片染色： 1、无需脱蜡，直接迅速用蒸馏水冲洗 2～3min。 2、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。 （三）细胞染色： 1、4%多聚甲醛固定10～20min。 2、自来水冲洗2 次，每次2min。 3、蒸馏水冲洗 2 次，每次2min。 4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。 产品简介： 含铁血黄素(Hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其含铁，且为金黄色，故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体酶的作用下，血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。Perls 普鲁士蓝反应(Prussianbluereaction)又称为含铁血黄素染色，即经过亚铁氰化钾和稀酸处理后可以产生蓝色，常见于吞噬细胞或间质内，主要显示三价铁盐。普鲁士蓝是非常经典的组织化学反应，是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法，其染色原理在于亚铁氰化钾溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来，三价铁与亚铁氰化钾反应，生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁氰化物普鲁士蓝，所以该反应被称为普鲁士蓝反应。三价铁的亚铁氰化物是一种很稳定的化合物，在反应后可用红色染色剂进行复染，如核固红、伊红、中性红等。 普鲁士蓝染色用于显示局部组织内的各种出血性病变，常见于吞噬细胞内。在判断含铁血黄素沉积时，用Perls 反应可以得到证实,该染色法可以很好地区分含铁血黄素与其他色素。该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广，可以进行复染。该染色液的复染液采用伊红染，复染时间较核固红染色液要短。 产品组成： 试剂(A): Perls stain A1:Perls stainA 25ml 50ml RT A2:Perls stainB 25ml 50ml RT 临用前，取A1、A2 等量混合即为Perls stain，不宜提前配制。 试剂(B): 伊红红染色液 50ml 100ml RT 避光 使用说明书 1 份 注意事项： 1、切片脱蜡应尽量干净。 2、组织固定常采用10%中性福尔马林，经普通福尔马林长期固定后，组织会有损伤。避 免使用酸性固定剂，铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。 3、整个操作过程中容器要干净，避免用金属铁制品，洗切片和容器时以蒸馏水为宜，因普通水内含铁质。 4、Perls stain 染色时，应根据样本情况调整着色时间。 5、所有切片都应使用同一个阳性对照切片，选择适合的对照非常重要。尸检肺组织是一个很好的对照，包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞)。 6、系列乙醇应经常更换新液。 7、冰冻切片和细胞的染色，最好根据具体情况摸索实验条件。 8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。