人III型胶原 (Co III)ELISA检测试剂盒

人III型胶原 (Co III) ELISA 检测试剂盒 试剂的准备 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行： 800 ng/ml （6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 400 ng/ml （5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 200 ng/ml （4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 100 ng/ml （3号标准品） 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 50 ng/ml （2号标准品） 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 25 ng/ml （1号标准品） 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 0 ng/ml （空白对照） 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。 操作步骤 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。 在450nm波长处测定各孔的OD值。 建议使用的实验方案 标准品浓度（ng/ml） A 800 800 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 B 400 400 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 C 200 200 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 D 100 100 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 E 50 50 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 F 25 25 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 G 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 局限 6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。 试剂盒性能 1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。 2. 特异性：不与其它细胞因子反应。 3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。