细胞培养过程污染有哪些?

人为操作污染 空气：操作净化工作台，工作不带口罩，外界气流过强,温度大，含菌 消毒：残留污物 操作：马虎不准确，观念不强 血清：检测不严，支原体和病毒 组织：原代组织有污染，手术中污染，本身是污染组织（溃烂的肿瘤，碘酒消毒后，擦试不净。可能混入污染） 细胞培养污染对细胞的影响 污染时间短、轻，及时排除，细胞可能恢复，细胞变粗糙，细胞轮廓增强。? 轻：细胞生长缓慢、分裂相； 重：停止增殖，分裂相消失，胞质中出现大量堆积物，细胞变圆，崩溃并从瓶壁脱落。 微生物的污染 （1）支原体：无致死毒性，可与细胞长期共存，对细胞影响潜在。 （2）霉菌 （3）细菌：增殖快，短时间在数量上压过细胞产生毒素杀死细胞。 （4）病毒 （5）真菌：种类繁多，形态各异，呈白色或浅黄色小点，飘浮于培养液面，肉眼可见。 镜下：呈丝状或管状、树枝状丝，纵横交错穿行于细胞间。 （6）支原体：介于细菌与病毒之间，能独立生活的最小微生物无细胞壁，形态多样，0.2um，可通过滤器圆形丝状或梨形，在光镜下很难看清结构。 对青霉素普遍有抗药性。 细胞受到支原体污染后出现以下情况： 严重：细胞增殖缓慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。 轻：无明显变化，或有微细变化由于传代和换液而缓解观察不够细心或缺乏经验，检查不出。 支原体检测： 相差：油浸下观察，暗色微小颗粒，有类似布朗运动，分布细胞表面和细胞之间。 值注：支原体与线粒体相似，需加以区别支原体染色Carnoy固定。 低张处理地依红：地依红 2g冰醋酸 60ml加水至 100ml染色 15 分钟脱水封固。 光镜：支原体为暗紫色小体,附细胞外或散在细胞之间。 Hoechst33258：为DNA特异结合的荧光探针，支原体DNA能被着色，是检测支原体最方便、有效的一种方法。 染色 10 分钟，漂洗后观察。?醋酸:甲醇（1:3）固定，33258（50 g/ml） 工具：微孔滤膜：能滤除支原体在内的粒子，处理受支原体污染的培养液或血清，但不能去掉附于细胞表面的支原体。 药物：溴尿嘧啶（Bromouracil）支原体的DNA也摄取溴尿嘧啶，用光照射，通过光敏效应杀灭支原体。