呕吐毒素（vomitoxin）快速检测ELISA试剂盒操作流程图

9 酶免分析步骤 9.1 实验须知 9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室 温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存 注：一定保证回温充分，否则影响检测的精确度和准确度。 9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存 9.1.3 请不要改变分析程序 9.1.4 请使用精确的微量移液器 9.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序 9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作 9.1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样 9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面 9.2 分析步骤 9.2.1 预先进行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测 9.2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存 9.2.3 样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（20×）稀释成工作液（蒸馏水或去离子水稀释） 9.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml标准品溶液 3 9.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液 9.2.6 在各样品孔中加入50μl样品溶液 9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗呕吐毒素（vomitoxin）抗体酶结合物 9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。 9.3 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差） 9.3.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液 体。 9.4 反应 9.4.1 洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl显色液A，再加 50μl显 色液B；轻微晃动反应板使之彻底混匀 9.4.2 37℃温浴10min 9.4.3 每孔中加入50μl终止液，混匀 9.4.4 在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。 10 结果计算 10.1定量分析 10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准） 的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。 B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 B0—0μg/L标准溶液的平均吸光度值