ELISA抗原竞争法检测sIL-2R含量的操作流程

本法是用纯化或重组的IL-2R（α链，P55，CD25，Tac抗原）蛋白包被96孔酶标反应板，同时加入已知量的抗IL-2RMcAb，再分别加入sIL-2R标准品与待测样品。则待测sIL-2R或者sIL-2R标准品与包被的纯化或重组的IL-2R蛋白竞争与抗IL-2R McAb结合。通过与标准品对照，从抗IL-2R McAb与包被的纯化或重组的IL-2R蛋白结合受抑制程度来求得待测样品中sIL-2R含量。【操作步骤】 （1） 以一定浓度的纯化或重组的IL-2R（P55）蛋白包被96孔酶标板，100ul/孔，4℃过夜（16-72h）； （2） 弃包被液，用1%BSA-PBS封闭非特异性结合位点，200ul/孔，置室温2h； （3） 用洗涤液加满各孔置3min，然后倾去，反复洗涤3次； （4） 分别加入不同稀释度的sIL-2R标准品及待测样品，50μl/孔； （5） 各孔均加入FITC标记的IL-2R McAb，50μl/孔，充分混匀后置室温2h； （6） 同上洗涤3次； （7） 各孔均加入碱性磷酶酶标记的兔抗FITC抗体，100μl/孔，置室温1h； （8） 同上洗涤3次； （9） 各孔均加入底物液，100μl/孔，置室温15-30min； （10） 用酶标仪以波长405nm测各孔OD值。