猴孕激素/孕酮（PROG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

猴孕激素/孕酮（PROG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒用于测定猴血清、血浆及相关液体样本中孕激素/孕酮（PROG）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猴孕激素/孕酮（PROG）素/孕酮（PROG）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入孕激素 /孕酮（PROG），再与 ?HRP 标记的孕激素/孕酮（PROG）抗体 ? ?，形成抗体-抗原-酶标抗。用纯化的猴孕激体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 ? HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的孕激素/孕酮（PROG）呈正相关。用酶标仪在 ?450nm 波长下测定吸光度（ ?OD 值），通过标准曲线计算样品中猴孕激素/孕酮（PROG）浓度。 试剂盒组成 30倍浓 20ml×1瓶 6ml×1瓶 终止液 6ml×1瓶 2 ? 酶标试剂 标准品（ 0.5ml×1瓶 2400 pmol/L） 标准品稀释液 3 ? 酶标包被板 4 ? 样品稀释液 5 ? 显色剂 A液 6 ? 显色剂 B液 12孔×8条 标本要 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因 ? NaN3抑制辣根过（HRP）活性。 操作步骤 1. ?标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 1200 pmol/L 600 pmol/L 300 pmol/L 150 pmol/L 75 pmol/L 5号标准品 4号标准品 3号标准品 2号标准品 1号标准品 150μl的原倍标准品加入 ?150μl标准品稀释液 150μl的 ?5号标准品加入 ?150μl标准品稀释液 150μl的 ?4号标准品加入 ?150μl标准品稀释液 150μl的 ?3号标准品加入 ?150μl标准品稀释液 150μl的 ?2号标准品加入 ?150μl标准品稀释液 ? 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 温育：用封板膜封板后 37℃温育30分钟。 30倍稀释后备用 配液：将 30倍浓 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静重复 5次，拍干。30秒后弃去，如此 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。 温育：操作同 3。 洗涤：操作同 5。 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟. 10.终止：每孔加终止液 ? ?50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。 操作程序总： 计算以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 ?OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 ?OD值大于标准品孔第一孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6个月