小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书

小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中胰高血素样肽1(GLP-1)的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰高血糖素样肽 1(GLP-1)水平。用纯化的小 鼠胰高血糖素样肽 1(GLP-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰高血糖素样肽 1(GLP-1)，再与 HRP标记的胰高血糖素样肽 1(GLP-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰高血糖素样肽1(GLP-1)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰高血糖素样肽 1(GLP-1)浓度。 1. 血清：室温血液自然凝固 10-20分钟，离心 20分钟左右（20003000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细内成份。离心 20分 钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀成，应再次离心。 5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收上清。分装后一份待检测其余冷冻备用。 6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7.不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶（HRP）活性。 操作步骤.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10孔，在第一、第二孔中分别加标准品 100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取 100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl弃掉，再各取 50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl加到第九、第十孔中，再在九第十孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μ弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl，浓度分别为 3pmol/L，2pmol/L，1pmol/L，0.5pmol/L， 0.25pmol/L）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔