人乙肝核心抗原（HBcAg）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

人乙肝核心抗原（HBcAg）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中乙肝核心抗原（HBcAg）表达。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人乙肝核心抗原（ HBcAg）表达。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中乙肝核心抗原（ HBcAg）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 ?HRP 标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 ? HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），与 ? CUTOFF值相比较，从而判定标本中人乙肝核心抗原（HBcAg）的存在与否。 试剂盒组成 30倍浓缩洗涤液 阳性对照 阴性对照 3 ? 酶标包被板 4 ? 样品稀释液 5 ? 显色剂 A液 6 ? 显色剂 B液 10 ? 说明书 11 ? 封板膜 12 ? 密封袋 2张 1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因 ? NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. ?编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 ?2孔、阳性对照 ?2孔、空白对照 ? 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 2. ?加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 ? ?50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 ?40μl，然后再加待测样品 ?10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀， 3. ?温育：用封板膜封板后置 ?37℃温育30分钟。 4. ?配液：将 ?30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 ?30倍稀释后备用 5. ?洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 ?30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。 6. ?加酶：每孔加入酶标试剂 ?50μl，空白孔除外。 7. ?温育：操作同 ?3。 洗涤：操作同 5。 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 10.终止：每孔加终止液 ? ?50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。 操作程序总结： 计算和结果判定： 试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品 OD值<临界值（CUT ? ?OFF）者为乙肝核心抗原（HBcAg）阴性阳性判定：样品 OD值≥临界值（CUT ? ?OFF）者为乙肝核心抗原（HBcAg）阳性。 注意事项 1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。 2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 5．底物请避光保存。 6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 ?630nm 7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M的硫酸，使用时必须 注意安全。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6个月