大鼠 1，25-二 D3(1,25-(OH)2D3)酶联免疫分析ELISA试剂盒

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠1，25-二平。用纯化的大鼠 1,25-(OH)2D3 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 1,25-(OH)2D3，再与 HRP标记的1,25-(OH)2D3抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体D3(1,25-(OH)2D3)复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸 的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 1,25-(OH)2D3 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠 1，25-二 D3(1,25-(OH)2D3)浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成 说明书 48孔配 1份 96孔配 1份 保存 封板膜 2片（48） 1个 2片（96） 1个 密封袋 酶标包被板 标准品：90ng/L 标准品稀释液 酶标试剂 样品稀释液 显色剂 A液 显色剂 B液 终止液 1×48 1×96 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 0.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 3 ml×1瓶 3 ml×1瓶 3 ml×1瓶 3 ml×1瓶 3ml×1瓶 （20ml×20倍）×1瓶 0.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 6 ml×1瓶 6 ml×1瓶 6 ml×1瓶 6 ml×1瓶 6ml×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 浓 样本处理及要 ： 1. 血清：室温血液自然凝固 10-20分钟，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现 ，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有 ，应该再次 离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程 ，应再次离心。胸腹 、脑脊液参照实行。 中如有 4. 细胞培养上清：检测分 ，用无菌管收集。离心 20分钟左右（2000-3000转/ 1分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有，应再次离心。 5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液 用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或匀浆器 将标本匀浆充分。离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待 检测，其余冷冻备用。 6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7.不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过 （HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品 100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从第一孔、第二 孔中各取 100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl， 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl弃掉，再各取 50μl分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取 50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混 匀后从第七、第八孔中分别取 50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl， 浓度分别为 60ng/L，40ng/L，20ng/L，10ng/L，5ng/L）。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。