兔肿瘤细胞分离液说明书

为方便广大用户使用，试剂内容如下： 兔肿瘤细胞分离液说明书名称 产品规格 编号 A 兔肿瘤浸润组织单个核细胞分离液 200ml B 样本稀释液（赠品） 2010C1119 200ml C 清洗液（赠品） 2010X1118 200ml D F液（赠品） F2013TBD 200ml E 说明书 1份 兔肿瘤细胞分离液说明书【实验前准备】 A．适用仪器 最大离心力可达1200g的水平转子离心机 B．耗材 产品名称 产品货号 产地 15ml离心管散装 339650 美国 NUNC 15ml离心管架装 339651 美国 NUNC 50ml离心管散装 339652 美国 NUNC 50ml离心管架装 339653 美国 NUNC 无菌胶头滴管或塑料滴管 兔肿瘤细胞分离液说明书【检验方法】 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。 1.首先制备组织单细胞悬液，制备方法详见“组织单细胞悬液制备技术”。 2.取一支15ml离心管，加入与组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于 3ml）。 3.用吸管小心吸取组织单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g，离心20-30min。（注： 根据组织单细胞悬液量确定离心条件，组织单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间 越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最理想分离效果）。 4.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色单 个核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。 5.用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一15ml离心管中，向离心管中加 入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。 6. 250g，离心10min。 7.弃上清。 8.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。 9. 250g，离心10min。 10.重复 7、8、9，弃上清后以 0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。 【注意事项】 1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。为获得最理想的实验结果，最 好在取样2h内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h后 分离效果更差甚至不能达到分离目的。 2.本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离 心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面 会变成毛面，影响细胞分离效果。 3.吸取过多的单个核细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的 粒细胞数量增加。 4.分离液用量大于组织单细胞悬液样本时，分离效果更佳。 5.如实验后细胞得率或活性过低，请联系上海研谨以寻求帮助技术支持。 【储存条件及有效期】 18-25℃保存，有效期 2年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启 封后置常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。 【参考值（参考范围）】 本实验淋巴细胞提取率及纯度大于 80%。 下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。