纯化线粒体膜通道孔（MPTP）荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途 纯化线粒体膜通道孔（MPTP）荧光检测试剂是一种旨在通过钙黄绿素载入后离心处理或钴淬灭技术，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，而存在于或由线粒体释放到线粒体外的荧光染料，即刻发生荧光去除或淬灭，来分析和观察线粒体膜通道孔活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种纯化线粒体膜通道孔活性（瞬时或长期开放状态）的检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。 技术背景 线粒体膜通道孔（mitochondrial permeability transition pore；MPTP）是由线粒体内外膜成分构成的非特异性且钙离子依赖性通道。在细胞凋亡或坏死时，线粒体内容物通过膜通道孔释放到胞浆中。膜通道孔的开放，显著改变线粒体的通透性。钙离子过度进入、线粒体谷胱苷肽的氧化和活性氧族水平的增加等导致膜通道孔的持续开放，而造成细胞色素C的释放和线粒体膜电位的消失。钙黄绿素-AM，又称双甲亚胺二乙酸钠荧光素－乙酰氧基甲基酯【bis（bis-carboxymethyl amino methyl fluorescein）-acetoxymethyl ester】，作为荧光探针：第一，适宜的分子量622kd，小于1.5kd；第二，几乎不具有膜结合性；第三，不是线粒体酶的底物；第四，容易进入细胞及其线粒体。钙黄绿素-AM进入线粒体后，被内酯酶切离，产生具有极性的荧光性强的钙黄绿素，被线粒体俘获。同时线粒体外的钙黄绿素通过离心去除或受到其淬灭剂钴离子的淬灭。一旦线粒体膜通道孔瞬时开放，钙黄绿素释放出线粒体外，由于离心处理或被钴离子淬灭。线粒体内钙黄绿素荧光的变化，表明膜通道孔的开放状态。