大鼠酶联免疫分析试剂盒使用说明书

大鼠酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中?SD大鼠一。用纯化的?SD大鼠一（NO）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一NO），再与?HRP标记的一???????（NO）抗体????，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物?TMB显色。TMB在???HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下（NO）呈正相关。用酶标仪在??450nm转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的一波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中??SD大鼠一（NO）浓度。 试剂盒组成 30倍浓 20ml×1瓶 6ml×1瓶 12孔×8条 6ml×1瓶 6ml×1瓶 6ml×1/瓶 终止液 6ml×1瓶 2???酶标试剂 标准品（80μmol/L）?????0.5ml×1瓶 3???酶标包被板 4???样品稀释液 5???显色剂?A液 6???显色剂?B液 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1份 10???说明书 11???封板膜 12???密封袋 2张 1个 大鼠酶联免疫分析试剂盒使用说明书标本要 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因???NaN3抑制辣根过（HRP）活性。 操作步骤 1.??标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 40μmol/L 20μmol/L 10μmol/L 5μmol/L 5号标准品 4号标准品 3号标准品 2号标准品 1号标准品 150μl的原倍标准品加入??150μl标准品稀释液 150μl的??5号标准品加入??150μl标准品稀释液 150μl的??4号标准品加入??150μl标准品稀释液 150μl的??3号标准品加入??150μl标准品稀释液 150μl的??2号标准品加入??150μl标准品稀释液 2.5μmol/L 2.??加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样?50μl，待测样品孔中先加样品稀释液?40μl，然后再加待测样品?10μl（样品最终稀释度为?5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.??温育：用封板膜封板后37℃温育30分钟。 4.??配液：将??30倍浓 30倍稀释后备用 5.??洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静??????30秒后弃去，如此重复?5次，拍干。 6.??加酶：每孔加入酶标试剂??50μl，空白孔除外。 7.??温育：操作同??3。 8.??洗涤：操作同??5。 9.??显色：每孔先加入显色剂??A50μl，再加入显色剂?B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟. 10.?终止：每孔加终止液??50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.?测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。??测定应在加终止液后?15分钟以内进行。 操作程序总??： 计算以标准物的浓度为横坐标，?OD??值为纵坐标，在坐标纸上，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与??OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的?OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 大鼠酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡?15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在?5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本??OD值大于标准品孔第一孔的?OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6个月