郑州大家硕士学位论文洛美 沙 星 和阿莫西林

中文摘要 洛美 沙 星 (lomeflox和，LMF) 和阿莫西林(姗oxicillin，AMX)分别属于氟喳诺酮类 和p一内酞胺类抗生素，目前在临床兽药上应用十分广泛。二者在畜禽食品中的残留都会引 起一系列后果，例如诱导耐药菌株的产生、敏感人群产生过敏反应等。因此，针对二者残 留的快速检测方法的建立对控制动物性食品的卫生质量、保障消费者健康等方面都具有比 较重要的社会和经济意义。 本研究旨在建立畜禽产品中洛美沙星和阿莫西林残留的间接竞争酶联免疫吸附 (C1一LlsA)检测方法。研究内容和结果如卜 1，通 过两种方法一碳二亚胺法和混合酸醉法分别把洛美沙星与阿莫西林两种半抗原和载 体蛋白牛血清白蛋白与卵清蛋白偶联制备免疫原(LMF书sA，AMX一BsA)和包被原 (LMFOv气AMX一OVA)。制备的人工抗原经紫外扫描和免疫动物实验进行了鉴定，结果 表明:偶联物的紫外吸收光谱明显具有药物和载体蛋白叠加的特征;通过免疫BALB/c小 鼠制各抗血清利用EUSA方法进行检测也证明了免疫原和包被原的成功合成。 2.为 了制各较多量的多克隆抗体，分别用LMF一BSA和AMX一BsA 作为免疫原免疫新西 兰纯种白兔。制备的抗血清分别用间接ELISA和间接竞争ELIsA 检测效价和特异性，结 果如下:洛美沙星抗血消终点效价在1:64(X)00以上，并且特异性良好;阿莫西林抗血清终 点效价在1:6400左右，但是特异性不理想，经进一步试验验证表明，抗体更多的针对阿 莫西林分解产物，究其原因是因为免疫原AMX一BSA在免疫过程中己发生部分分解所致。 3t通 过优化条件，初步建立了洛美沙星的Ci一ELISA检测方法。选取的检测优化条件为: 抗血清稀释度为1:400，封闭液为1%的酪蛋白溶液，包被原LMF一0、/A的稀释度为1:100， 辣根过氧化物酶标羊抗兔1如(HRP」gG)稀释度为1:1000。检测结果如卜:回归线性方程 为厂一02s65x+03689，相关系数R=o，962(其中y为B忍。，x为lglLMF])，线性范围在 。05林9八1〕1一5林9、ul之间，检测限为仪。24林9八111。高低中三个浓度的批内和批间相对标准偏差 的平均值分别为177%和23.2%，牛奶样品中的回收率在85%一120%之间。 4.本 实验对洛美沙星残留的的高效液相检测方法也作了一定的研究，建立了标准品和牛 奶样品中洛美沙星的HP优测定方法，结果如下:对洛美沙星标准品求得的回归方程为: H=7刀763c一3918(H表示峰高，c表示浓度)，卜09999，线性范围为:0.lp岁栩1一100卜岁ml， 检测限为0.o62“砂nll(5舰=3);对牛奶样品用甲醇作处理后进样检测，求得的回归方程为: H=50733c+03207，R=0，999，线性范围为0.111留InlZoopg/ml，检测限为021卜留ml(5闪=3)， 提取回收率在70%一80%。以HPLC为标准参比方法验证Ci一LlsA方法的可靠性，求得的 回归方程为:Y=0.9985X十0刀202，相关系数R=住98%《二11)，表明两种方法相关性良好， Ci一LlsA法可实际应用于洛美沙星残留的测定。 关键词:洛美沙星;阿莫西林;多克隆抗体:EUSA