阿维菌素单克隆抗体的制备与鉴定

郭东华,徐世文,李　术 (东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨　150030) 　　摘要: 将与牛血清白蛋白(BSA) 偶联的阿维菌素人工合成抗原AVM2BSA 免疫8 周龄雌性 BALB/ c 小鼠,利用杂交瘤技术获得了2 株分泌抗阿维菌素特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名 为2F2 和2H10 。生物学特性鉴定的结果表明,2 株杂交瘤细胞株诱生腹水的效价为1 ∶6 400 ,分泌 的抗体亚型均为IgM ;间接竞争酶联免疫吸附试验结果表明,抗体的50 %抑制质量浓度( IC50 ) 为 101 ng/ mL ,2 株单克隆抗体与伊维菌素、多拉菌素、红霉素和白霉素均无交叉反应,证实单克隆抗 体2H10 具有很强的特异性,可用于阿维菌素药物残留免疫分析方法的建立。 关键词: 阿维菌素;单克隆抗体;间接竞争酶联免疫吸附试验 Preparation and identif ication of monoclonal antibodies against avermectin GUO Dong2hua ,XU Shi2wen ,L I Shu ( Col lege of Veterinary Medicine , N ortheast A g ricul tural Uni versi t y , Harbin 150030 , China) 　　Abstract : Eight2week2old female BALB/ c mice were immuned int raperitoneally wit h avermectin (AVM) coupled wit h bovine serum albumin (BSA) . Two hybridoma cell lines secreting monoclonal anti2 bodies (McAbs) against AVM ,which were named respectively as 2F2 and 2H10 , were obtained by using t he hybridoma technique. In result s , subtype of t he two McAbs was IgM , and titer s of t heir ascetic fluids were 1 ∶6 400 approximately in indirect EL ISA. The two McAbs had no cross2reaction wit h ivermectin , doramectin , eryt hromycin and albomycin , respectively and t heir 50 % of inhibition concent ration was 101 ng/ mL in Ci2EL ISA. The result s showed that 2H10 wit h high specificity will be usef ul for t he development of met hods for t he immunologic determination of AVM residues. Key words : avermectin ; monoclonal antibody ; Ci2EL ISA 　　阿维菌素(avermectin ,AVM) 是兽医临床上使 用最多的抗体内外寄生虫药物,也是农业生产上广 泛使用的一种杀虫剂。自1970 年发现以来,作为一 种抗寄生虫药物,AVM 由于其特异的驱虫作用和 较高的安全性,被视为目前最好的、应用最广泛的高 效、低毒兽用抗寄生虫药,但在促进农业和畜牧业发 展的同时,由于AVM 的不合理使用或滥用,导致其 残留现象越来越严重,对人类的健康和生态环境产 生了不良影响[1 ] 。因此,有必要建立一种快速、灵敏 的用于监控AVM 残留的检测方法。目前,AVM 残留的检测方法仍以Pivnichny 等[2 ] 建立的荧光衍 生化试剂检测为基础的高效液相色谱法( HPLC) 为 主,但该方法对样品净化和分析操作要求严格,降低 了其在实际应用中的可操作性。免疫分析方法以其 高效性、灵敏性和快速著称,国内李俊锁等[ 3 ] 利用多 克隆抗体建立了牛组织中AVM 残留的间接竞争酶 联免疫吸附测定法,为AVM 残留的免疫学检测奠 定了基础。单克隆抗体与多克隆抗体相比有其均质 性好、特异性强、敏感度高、廉价和易于大量生产的 优点[ 4 ] 。目前, 国内外尚无用单克隆抗体检测 AVM 残留的报道。因此,笔者进行了AVM 单克 隆抗体制备的研究,旨在为AVM残留的检测提供 收稿日期: 2006207211 ; 修回日期:2006210218 基金项目: 国家自然科学基金项目(30200204) 作者简介: 郭东华(1978 ) ,女,黑龙江同江人, 博士生,E2mail :amu1018 @126. com。李术为通讯作者,副教授,从事动物 营养生理学、环境毒理学研究,Tel :0451255190407 ,E2mail :lishu101 @yahoo. com. cn 中国兽医科学　2006 ,36 (12) :101921023 Veterinary Science in China