高效液相色谱质谱法测定格尔德霉素基因阻断变株产物

摘要 目的：在研究格尔德霉素(GDM)生物合成的过程中利用基因阻断技术分别阻断GDM生物合成的起始基因3一氨基一 5一羟基苯甲酸(AHBA)基因、含AHBA基因并与之相连的聚酮合酶(PKS)基因簇以及GDM生物合成相关的PKS和PKS后 修饰基因簇CT—PKS获得3个GDM基因阻断变株。为了比较分析他们的次级代谢产物，采用高效液相色谱质谱法测定发酵 液组分。方法：发酵液经过乙酸乙酯提取后用反相高效液相色谱分析。分析柱为迪马公司Diamonsil (钻石)C。。(4．6 mm× 150 mm，5 m)；流动相是40％ 一100％甲醇，30 min梯度洗脱；流速1 mL·min～；二极管阵列检测器(DAD)，检测波长304 nrn。利用电喷雾质谱(ESI)通过正负离子扫描获得相应化合物的相对分子质量信息；利用质谱的源内裂解技术获得相应化合 物的结构信息。结果：检测发现，阻断2个不同的GDM生物合成基因以后主要产生2个不同于GDM的化合物。结论：该方法 可快速、准确地对基因工程变株发酵新产物进行早期鉴别，指引后续的化学分离，并用于其他GDM基因阻断变株产物的定 性。 关键词：格尔德霉素(GDM)；发酵产物；高效液相色谱；电喷雾质谱