动物细胞微丝束的光学显微镜观察

一、材料 体外培养的动物细胞。 二、试剂 1. 0.01 mol/L 磷酸盐缓冲生物盐水(PBS)配法 0.2mol/L Na2HPO4/KH2PO4缓冲液(pH7.3) 50 ml NaCl 0.15 mol/L 重蒸馏水 至1000 ml 其中PB的配法: 0.2mo1/L Na2HPO4 77 ml 0.2mo1/L NaH2PO4 23 ml 2. M-缓冲液 咪唑(imidazole, pH6.7) 50 mmol/L KC1 50 mmol/L MgCl2 0.5 mmol/L EGTA l mmol/L EDTA 0.l mmol/L 巯基乙醇(mercaptoethanol) l mmol/L 甘油 4 mmol/L 用1 mol/L HCl调pH至7.2。 3. 1%的Triton X-l00/M-缓冲液 4. 0.2%考马斯亮蓝R250染液，溶剂是: 甲醇 46.5 ml 冰醋酸 7 ml 蒸馏水 46.5 ml 5. 30%戊二醛-PB溶液，pH7.2 三、器材 显微镜、载玻片、35mm小染缸。 实 验 方 法 细胞培养在盖玻片上，生长密度达++~+++时取出 ↓ PBS液轻轻涮洗 ↓ l% TritonX-l00/M-缓冲液处理l5min（室温或37℃） （Triton X-l00是非离子型表面活性剂(去污剂)，能增加细胞膜通透性并抽提部分杂蛋白质，使骨架图像更清晰） ↓ M-缓冲液轻轻洗细胞3次（稳定细胞骨架） ↓ 3%戊二醛-PB液固定细胞5~l5min ↓ PBS液洗细胞若干次 ↓滤纸吸干 0.2%考马斯亮蓝R250染片30min ↓ 小心地用水漂洗 ↓ 空气干燥